高效液相色谱柱前衍生法分析分离DL-薄荷醇(4)
(1) 紫外衍生反应
在液相色谱法中，紫外吸收检测器是最常见的一种高灵敏度检测器。但是有很多化合物在紫外可见光谱区没有吸收，而不能被检测。将它们与带有紫外吸收基团的衍生试剂在一定条件下发生反应，由于反应物带有发色基团而能被检测。
胺类化合物的衍生化常用卤代烃衍生化试剂[28-30]，酰氯类衍生化试剂，N-琥珀酰亚胺对硝基苯乙酸酯；α-氨基酸的衍生化常用异硫氰酸苯酯（PITC），茚三酮；羧酸的衍生化常用苯甲酰溴，对硝基苯甲酰溴，对氧基苯甲酰溴和对溴苯甲酰溴等；由于酰氯的化学性质很活泼，易与亲核试剂发生反应，它不仅是胺类化合物的衍生试剂，同时也是烃基化合物的衍生试剂。
(2) 荧光衍生反应
液相色谱中的荧光检测器是一种高灵敏度、高选择性的检测器，比紫外吸收检测器的灵敏度要高10~1000倍，尤其适合于痕量分析。但是液相色谱法中一些重要的分离对象如高级脂肪酸、氨基酸[26]、生物胺、甾体化合物和生物碱等本身不发荧光，主要依靠荧光衍生试剂与这类化合物反应，接上荧光生色基团达到痕量检测的目的。荧光衍生物的选择性好，它的激发波长和发射波长与衍生试剂不一样，即使有过量的试剂或反应副产物存在于反应液中，也不会产生干扰。
丹磺酰氯（DNS-Cl）是一种应用很广的荧光衍生试剂，它可以与氨基酸、胺类和酚类化合物反应生成强荧光衍生物。另外，丹磺酰氯也用于蛋白质及肽的末端基团分析。丹磺酰肼能与醛类、酮类化合物反应，包括甾酮、还原糖和蛋白等，生成丹磺酰腙衍生物。荧光胺只能与伯胺反应，是一种选择性试剂。虽然荧光胺本身没有荧光，但在碱性条件下，它与伯胺及伯胺氨基酸能很快反应形成具有荧光的产物。
（3） 手性衍生法
手性化合物的高效液相色谱分析方法主要有三种：用手性固定相分离；在流动相中生成非对映体分离；通过衍生化生成非对映体分离。手性衍生法是用手性试剂与外消旋体反应，在分子内导入另一手性中心，柱前衍生反应生成一对非对映异构体，两者之间无镜像关系，物理化学性质不同，可以用常规的色谱分离条件进行分离。选用该法分离通常基于一下原因：
a.不宜直接拆分，如游离胺类在手性固定相上往往呈较弱的色谱性质，生成中性化合物则获得显著改善；添加某些基团，以增加色谱系统的对映异构体选择性；
b.提高紫外或荧光检测的效果。
一般手性衍生法需要满足以下条件：
a.溶质分子至少必须有一个官能团供衍生；
b.手性衍生试剂尽可能达到对映体纯，并且没有选择性地与两种溶质对映体反应；
c.反应条件必须温和、简便、完全，在溶质与衍生试剂间无消旋化发生；
d.生成的非对映异构体应当容易被裂解为原来的对映异构体。
1.3 本课题的研究目的
由于市场上对L-薄荷醇的需求量日益增加，仅依靠从天然产物薄荷中提取[6-7]已不能满足市场需求，因而更多的厂家越来越依赖于化学合成的薄荷醇。目前，合成薄荷醇的方法主要有化学合成和不对称合成，不对称合成是使用手性诱导催化剂将无手性作用物转化成光学活性物，得到某个异构体的量占优势。然而，不对称合成手性催化剂的种类有限，且价格昂贵。化学合成薄荷醇易得到消旋的薄荷醇。所以重点在于薄荷醇拆分得到L-薄荷醇。
目前，薄荷醇的手性拆分方法主要有化学拆分和生物酶拆分。但化学拆分和生物酶拆分都有较大的不足，都不利于工业大规模拆分生产。已有研究利用色谱分离薄荷醇的方法：用取代的β-环糊精作为固定相进行气相色谱分离，但不能达到完全分离；液相手性分析用旋光检测器得到的灵敏度较低。