HP-8: TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTAAAAAAAA

HP-10: TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTAAAAAAAAAA

HP-12: TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTAAAAAAAAAAAA

1.3实验步骤

实验的准备：实验用DNA链均用MOPS缓冲液溶解成30 M，分装保存备用。先将分装的DNA链取出一管，稀释成15 M，淬火处理后室温保存备用。

取7个容量为0.6 mL的离心管，分别标记为1~7，加入10 µL(15 M HP-12)，然后分别加入36 µL、38 µL、35 µL、38 µL、39 µL、39.5 µL、40 µL的MOPS缓冲溶液，混匀后，加入Exo Ⅲ凑成50 µL反应液，再混合均匀，在37℃恒温水浴锅中反应1h。-源^自,吹冰<文.论(文]网>www.chuibin.com接着分别加入230 µL MOPS缓冲溶液，10 µL（60 mM）抗坏血酸钠溶液（现配），振荡混匀后，加入CuSO4（6 mM）溶液10 µL，于25 ℃恒温水浴锅中放置10 min。然后进行荧光检测，并做好实验记录与数据处理。参数设置：激发波长为360 nm，收集波长的范围为520-700 nm，数据导出后用Origin 8.0作图软件进行数据处理。

2结果与讨论

2.1实验原理和DNA探针设计

本方法是利用Exo Ⅲ降解HP生成游离的Poly T，然后以此作为合成荧光Cu NPs的模板，进而非标检测Exo Ⅲ的活性。实验原理如图1所示：图中为一条单链DNA，其3'端附近的碱基(8~12个A)可与中间部分的碱基T进行互补杂交，于缓冲溶液中淬火处理，该DNA可自杂交形成发夹结构（HP，如图1所示）。而HP 5'末端突出一段单链Poly T序列，但由于其碱基数目过少，不能有效合成荧光Cu NPs