阳离子表面活性剂对量子点聚合度的影响(2)
量子点团聚度测量原理是根据量子点光谱蓝移与漂白的差异性[6]。所谓光谱蓝移就是光谱像向短波方向移动，这是不可逆的源!自`吹冰'文"论/文`网[www.chuibin.com，量子点尺寸越小，发射的荧光波长越短，在长期的时间的光照下，溶液中的量子点的核被氧化，从而量子点核的有效尺寸减小，从而使光谱蓝移[3]。AT Ⅲ修饰过量子点聚合体在溶液中是单分散的，加入肝素以后，这个聚合体也是单分散的，因为一个肝素分子与一个抗凝血酶Ⅲ分子结合，在阳离子表面活性剂形成的胶束溶液中，QDs-ATIII-heparin复合体通过静电作用，与带正电荷的亲水基团的表面活性剂发生相互作用，形成聚合体。观察量子点聚合体，来区分量子点是聚合的还是单分散的，我们实验室开发了一种光谱成像显微镜，即在电子倍增电荷耦合器件（EMCCD）前插入一个透射光栅，这种显微镜记录了量子点的蓝移和漂白过程[5]。因为量子点的漂白和蓝移过程不是同时的[6]，聚合的程度可以通过记录量子点的一级条纹的分裂次数来表示[7]，
在荧光图像上，单个量子点和聚合量子点的零级条纹和一级条纹是不同的，从光照到由于光学漂白的消失，单个量子点从一级条纹一直保持不变，而聚集的量子点从一级条纹是分裂，直至最后发生光学漂白。我们只需记录这些量子点是否来自单个量子点，而不是记录这些量子点聚集体中具体的量子点的个数[7]。如果一级条纹发生分裂，无论这里面有多少量子点，它就是量子点的聚集体。 图 1. 单个量子点和量子点聚集体在光学显微镜的成像对比， A 图是单个量子点的漂白过程，B 图是量子点聚集体的一级条纹随着时间分裂并且逐渐漂白消失。 如图 2 所示：本论文中是用的是羧基量子点，并且把它用AT Ⅲ修饰，在这体系中加入肝素和阳离子表面活性剂，肝素分子中有多个阴离子基团，因此阳离子表面活性剂所带的正电荷与溶液中肝素所带负电荷的量子点发生静电作用，发生团聚，形成聚合体。量子点的团聚程度与许多因素有关，如反应时间、体系的温度、pH 值、阳离子表面活性剂等[8]。而本论文只探究阳离子表面活性剂对量子点聚合度的影响。由于目前并没有找到解决量子点团聚的有效方法，所以就目前而言，依据单分子计数法来定量计算量子点-抗凝酶-肝素体系团聚体的聚合度2 实验部分 2.1 试剂 量子点(QD655-COOH，8 μM，Invitrogen / Molecular Probes, Eugene, OR, USA)；抗凝血酶(AT-III)（中国上海东风生物技术)；实验室自配硼酸缓冲液(pH 8.3, 50 mM) ； EDC(Sigma-Aldrich Corporation,USA) ；所有水为超纯水（18.2MΩ·cm-1） ；肝素（heparin,150 U/mg, Biosharp,合肥） ；苄基十六烷基二甲基氯化铵（BAC-16 TCI Development Co., Ltd 中国上海） ；苄基十四烷基二甲基氯化铵（BAC-14 TCI Development Co., Ltd 中国上海） ；十六烷基溴化吡啶鎓水合物（CPB TCI Development Co., Ltd 中国上海） 。 2.2仪器 载玻片(Shitai Experiment Equipment Co. Ltd., 中国)；盖玻片采购于 Electron Microscopy Sciences(PA, US)； 倒置荧光显微镜(Olympus, BX51, 日本)； 电子倍增耦合器件(EMCCD, Evolve512, Photometrics, USA,)；100×油镜(UPLSAPO, Olympus, Japan)；透射光栅(70 线/mm, NJ, USA)； 镜头油(Nikon, 50 TYPE, Japan)； 移液枪(Eppendorf, 2.5 μL, 10 μL, 100 μL, 1000 μL, 德国)。实验过程中的溶液均用0.22μm 的水系滤膜过滤，数据分析软件 Image J (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA)。