富硒食品中硒含量的分光光度法研究(2)
(2) 生理需要量（以GPx达到饱和为正常生理功能指标）40μg/日（全血硒约0.1μg/mL）；
(3) 界限中毒剂量（指甲变形）800μg/日（全血硒1.0μg/mL）；
(4) 膳食硒供给量50～250μg/日（全血硒0.1～0.4μg/mL，最佳生理状态）；
(5) 膳食中硒的最高安全摄入量400μg/日（全血硒0.6μg/mL，建立硒储备、不发生任何毒副作用）。
若有硒中毒表现，仅需脱离高硒环境（减少膳食硒或停服补硒药品），即可自行痊愈。
有实验表明，人必须终身从饮食中获得足够的硒，才能有效地控制癌症及各种疾病的发生。
目前，测定硒的方法有分光光度法[2-4]，原子发射光谱法[5]，原子吸收法[6,7]，电化学分析法[8,9]，气相色谱法[10]，原子荧光光谱法[11,12]，循环中子活化分析法[13]，ICP-MS方法[14-16]等。近年来，酶促反应动力学分析法在临床、医药、农业、工业过程检测中具有广泛的应用[17]。酶催化荧光法由于灵敏度高、检出限低、选择性好、操作简单、快速等优点，受到了人们的广泛关注[18,19]。酶催化荧光法可以测定盐酸肾上腺素[20]，酚磺乙胺[21]，盐酸氯丙嗪[22]，盐酸多巴胺[23]等。在上述各种测定方法中，荧光光谱法准确度好，灵敏度高，所用仪器设备简单，是测定硒的常用方法，但所用的试剂毒性大，而且需要进口；中子活化法灵敏度高、且不损伤试样，但所需设备昂贵；电化学法近年发展较快，其灵敏度已达到或大于荧光法；原子吸收光谱法测定硒，虽然该方法灵敏度高，但基体干扰复杂；气相色谱法和原子吸收法灵敏度高，但精密度较差；经典分光光度法所需设备简单，但灵敏度较低；催化动力学光度法测定环境不易控制，准确度差，线性范围小；紫外分光光度法具有灵敏度高（可测到10-7g/mL），准确度好（相对误差为1%-5%，满足微量组分测定要求），选择性好（多种组分共存，无需分离直接测定某物质），操作简便、快速，仪器设备简单、便宜，应用广泛（无机、有机物均可测定）等诸多优点。
牛血红蛋白具有和天然生物酶吹冰根过氧化物酶(HRP)相同的铁卟啉辅基和相似的空间结构，因而具备了过氧化物酶的特性，并且具有稳定、价廉的优点[24]。在碱性介质中，牛血红蛋白酶催化过氧化氢氧化酸性铬兰K，降低溶液吸光度。硒对该反应有强烈的抑制作用，建立了一种分光光度法测定硒的新方法。方法的检出限为4.57×10-4μg/mL。该法具有操作简单、灵敏度高、选择性好的特点。
1.实验部分
1.1 仪器与试剂
22PC11010分光光度计；BS210S 电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司) 。
牛血红蛋白(生化试剂；国药集团化学试剂有限公司)溶液的配制：准确称取0.6780g牛血红蛋白，用蒸馏水溶解稀释，定容至100mL，配制成1.00×10-4mol/L的储备液；工作液：量取5.00mL的储备液，稀释至100mL，配制成5.00×10-6mol/L的工作液，现配现用。
酸性铬兰K(生化试剂，北京化工厂)溶液的配制：准确称取0.0587g,用水稀释成2.00×10-3mol/L的储备液；工作液：用水稀释成2.00×10-4mol/L的工作液，现配现用。
过氧化氢溶液的配制：量取过氧化氢1.00mL，用蒸馏水稀释至100mL,得到0.10mol/L的储备液；工作液：取1.00mL的储备液，稀释至100mL,配置成1.00×10-3mol/L的工作液，现配现用。
硒（上海美兴化工股份有限公司）标准溶液的配制：准确称取0.0590g的纯硒粉于100mL烧杯中，加入5.00mL1:1的HNO3，加热溶解后，加1.00mL浓H2SO4蒸至冒白烟，冷却后用少量水溶解，转入250mL容量瓶，用水稀释至刻度。得到100μg/mL的硒标准储备液。移取5.00mL的储备液于100mL的容量瓶中，得到浓度为5μg/mL的硒标准工作液。
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