1。2。2 幼体体重的测量

食用甲鱼卵孵化出幼体后,对新生幼体的体重进行测量,并且记录相关数据,比较不同温度处理下幼体体重的区别。

1。2。3 幼体注射细菌TL1

首先,将实验室内的温度控制在26±1 °C,整理培养箱内的水温,使其控制在25±1 °C;然后将新生甲鱼幼体放入水中适应一天。期间,从-80 °C冰箱中取出嗜水气单胞菌TLI,在28 °C的摇床中孵育12h,然后转接至新的试管中,待摇至OD=0。8左右时,便可以停止孵育。然后将转接摇好的菌液吸入离心管中,放入离心机,10000rpm离心5min,弃上清,若一次没有离心完可分次离心。用标准浓度的磷酸缓冲液(PBS)清洗沉淀2次,再离心,最后加入1mlPBS吹打混匀菌体沉淀,便可以进行注射。两种温度处理下的新生甲鱼幼体在出生48h内进行细菌注射,细菌的浓度梯度分别为5×106CFU、5×105CFU、5×104CFU、5×103CFU,每个梯度注射20只,每只食用甲鱼幼体的腹腔注射0。1ml菌液,观察它们10天内的死亡情况,并记录汇总。

1。2。4血清的收集文献综述

待两组不同温度处理下的甲鱼幼体出生后,于48小时内,取5只新生幼体,解剖后取其肝脏和血,作为实验空白对照组。另外留出一批甲鱼幼体,对其注射嗜水单胞菌(TL1),12小时后,取出其中5只存活的幼体,进行解剖,取其血液,作为实验组1;在注射嗜水气单胞菌(TL1)24小时后,再取出其中5只依然存活的甲鱼幼体,进行解剖,取出它们的血液,作为实验组2。将取出的血液样品放入4 °C的冰箱中静置过夜,然后以5000rpm的转速进行低速离心,抽取离心后的上清液,分装保存在多个管中,以便用于日后多次使用。所有采集出的样品都在相应用于保存的管壁和管盖上作好标签,以便日后区分,然后存放于-80 °C冰箱中保存待用。

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