植物乳杆菌产细菌素JL-A65抑菌机制研究(3)
2．3 流式细胞仪检测细菌素JL-A65对两种指示菌细胞壁膜完整性的影响 8
2．3．1 流式细胞仪检测细菌素JL-A65对荧光假单胞菌细胞壁膜完整性的影响 8
2．3．2 流式细胞仪检测细菌素JL-A65对蜡样芽孢杆菌细胞壁膜完整性的影响 8
2．4 电导率仪检测细菌素JL-A65对两种指示菌细胞壁膜完整性的影响 9
2．4．1 电导率仪检测细菌素JL-A65对荧光假单胞菌细胞壁膜完整性的影响 9
2．4．2 电导率仪检测细菌素JL-A65对蜡样芽孢杆菌细胞壁膜完整性的影响 9
2．5 紫外分光光度仪检测细菌素JL-A65对两种指示菌细胞壁膜完整性的影响 10
2．5．1 紫外分光光度仪检测细菌素JL-A65对荧光假单胞菌细胞壁膜完整性的影响 10
2．5．2 紫外分光光度仪检测细菌素JL-A65对蜡样芽孢杆菌细胞壁膜完整性的影响 10
2．6 庆大霉素对两种指示菌最小抑菌浓度（MIC）的确定 11
2．6．1 庆大霉素对荧光假单胞菌最小抑菌浓度（MIC）的确定 11
2．6．2 庆大霉素对蜡样芽胞杆菌最小抑菌浓度（MIC）的确定 11
2．7 不同浓度庆大霉素对两种指示菌生长的影响 11
2．7．1 不同浓度庆大霉素对荧光假单胞菌生长的影响 11
2．7．2 不同浓度庆大霉素对蜡样芽孢杆菌生长的影响 12
3 讨论 12
致谢 14
参考文献 14
植物乳杆菌产细菌素JL-A65抑菌机制研究
引言细菌素(Bacteriocin)或细菌抗菌肽（Antimicrobial Peptide，AMP）是细菌通过其自身的代谢作用合成并从胞内分泌到外界环境中的一类对同源或亲缘关系较为相近的种属的生长繁殖有抑制作用的杀菌蛋白或多肽物质[1]。细菌素具有抑菌效率高、对外界无毒害、耐高温性能强、使用后无残留、不会产生抗药性等优点[2]。细菌素不但种类丰富多样，而且在自然界中普遍存在。为了开发更为高效、稳定的细菌素，评价细菌素的安全性，加快细菌素在工业中的应用，阐明细菌素的抑菌机制是极为重要的。
本课题旨在研究植物乳杆菌产细菌素的抑菌机制。细菌素的抑菌途径主要包括：破坏细胞壁膜的完整性、抑制菌体呼吸代谢过程中重要酶的活性、抑制DNA、RNA、蛋白质的合成、阻碍细胞壁的合成、诱导菌体出现自溶等[3]。细菌素分子结构上的疏水性氨基酸和连接在脂肪酸链末端的胍基是其发挥抑菌活性的关键功能基团[4]。现有研究尚未阐述清楚细菌素对菌体的作用方式以及作用靶点。本课题主要研究植物乳杆菌产细菌素对荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)和蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）的抑菌机制，通过观察细菌素JL-A65在宏观上对菌体生长的影响、以及细菌素JL-A65作用后培养液的物性变化，借此阐明其部分抑菌机制，为今后的进一步研究打下基础。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 菌株
植物乳杆菌JL-A65。
指示菌包括蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus AS1.1846）和荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens AS1.1802)。
以上菌株及细菌素均来源于南京农业大学食品科技学院酶工程研究室保藏。
1．1．2 主要试剂与材料
碘化丙啶购自阿拉丁试剂公司；其它试剂均为市售分析纯。
1．1．3 抗生素与培养基
庆大霉素。
LB培养基：胰蛋白胨10.0 g，酵母粉5.0 g，NaCl 10.0 g，蒸馏水1 L；pH 7.0、121℃、20 min灭菌备用，固体培养基另加1.5~2%的琼脂。