卤化酶单克隆发酵工艺优化(2)
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 菌种来源
（1）海洋链霉菌编号H1-H10.
（2）S.albus.J1074.
1．1．2 培养基
（1）MS液体培养基：大豆粉20g/L、D-甘露醇20g/L.
（2）R5培养基（1L配方）：蔗糖103g、硫酸钾0.25g、吹冰水合氯化镁10.12g、葡萄糖10g、酪蛋氨基酸0.1g、Trace element solutions0.52ml、yeast extract5g、TES Buffer5.73g、蒸馏水1000ml.
（3）MS固体培养基：大豆粉20g/L、D-甘露醇20g/L、琼脂糖20g/L.
（4）ISP4(50ml配方)：可溶性淀粉0.5g、磷酸氢二钾0.05g、硫酸镁0.05g、氯化钠0.05g、硫酸铵0.1g、碳酸钙0.1g、七水合硫酸亚铁1g/30ml取 2.745微升、氯化锰1g/50ml取3.925微升、硫酸锌1g/50ml取4.45微升
1 .1 . 3 主要仪器
（1）旋转蒸发仪
（2）HPLC高效液相分析仪
（3）摇床
（4）台式冷冻离心机
（5）电子天平
（6）30℃培养箱
（7）-86℃冰箱
（8）暗箱三用紫外线分析仪
（9）SW-CJ-1FD型超净工作台
1．2 方法
1. 2. 1 编号为ZF-1073的海洋菌菌株发酵优化实验
按照MS培养基配方配制MS固体培养基，趁培养基还是液体时倒10个平板，待这10个平板冷却后，接种编号为ZF-1073的白色链霉菌菌液，并在每个平板中加入200微升安苄抗生素，于30℃培养箱作为种子培养一周。一周后用棉棒蘸取长好的平板上的孢子收集、过滤滤除体积较大的颗粒物和渣滓，并于将过滤好的菌液放置于台式冷冻离心机离心五分钟，取上清液装于干净的塑料管中，保存于-86℃冰箱中，用于第二天使用。第二天，根据培养基的碳源设置实验的三个变量，分别是R5培养基配方中蔗糖含量正常组、R5培养基配方中蔗糖含量加倍组、R5培养基配方中蔗糖含量减半组，配置好这三组的液体培养基并进行试验。于超净台中每个培养基接种氨苄抗生素，每个三角瓶加氨苄抗生素25微升，取前一天收集好的孢子菌液加入培养基中，每个三角瓶加50微升，将接种完的菌株放置于28℃摇床，摇床转速设置为228转，培养一个周，一周后取出每瓶培养基中的树脂，用甲醇清洗浸泡后将液体倒入旋转蒸发仪中，水浴锅温度设置为50摄氏度，待瓶中完全干燥后再次用甲醇润洗，将润洗后的液体通过过滤灭菌后放入HPLC高效液相分析仪中