摘要食用甲鱼（中华鳖）是我国重要的淡水养殖品种。在养殖过程中,嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophilia)是重要的致病菌, 给甲鱼的养殖造成巨大的经济损失。为预防嗜水气单胞菌的感染，本实验对食品级的乳酸菌表达载体进行改造，获得一个能够将外源基因表达并携带至细胞外，同时方便检测和定位目的蛋白表达的新的乳酸菌表达载体，为后续研究与应用甲鱼的抗嗜水气单胞菌口服疫苗做好充分的准备工作。75260

Abstract Chinese soft-shelled turtles, Pelodiscus sinensis, is an important freshwater aquculture species in China。 Breaking out of diseases caused by Aeromonas hydrophilia has made huge economic losses during the culture of Chinese soft-shelled turtles。 In order to defend the infection of A。 hydrophilia, we constructed a Lactobacillus expression vector that carried exogenous gene and expressed protein extracellular with an tag for detection and location。 This vector can be used for the oral vaccine。

毕业论文关键词：食用甲鱼（中华鳖）； 嗜水气单胞菌； 乳酸菌表达载体

Keyword: Pelodiscus sinensis; Aeromonas hydrophila; Lactobacillus expression vector

目    录

1。 引言 4

2。 材料与方法 4

2。1 材料与试剂 4

2。1。1 细菌菌株及其生长条件 4

2。1。2 食用甲鱼蛋 4

2。1。3 主要分子生物学试剂 5

2。1。4 主要化学试剂 5

2。2 试验与方法 5

2。2。1 pEASYsUps45的构建 5

2。2。1。1 Ups45信号肽序列的克隆 5

2。2。1。2 PCR产物回收纯化---胶回收 6

2。2。1。3 连接 6

2。2。1。4 转化 6

2。2。1。5 阳性重组子的鉴定 7

2。2。1。6 测序及基因的鉴定 8

2。2。2 pEASYsUps45H的构建 8

2。2。2。1 双链接头的获得 8

2。2。2。2 双链接头5’末端的磷酸化 8

2。2。2。3 pEASYsUps45H的获得 9

2。2。3 sUps45-AH aroA-His序列的获得 9

2。2。3。1 嗜水气单胞菌TL1基因组的提取 9

2。2。3。2 aroA基因的克隆 10

2。2。3。3 pEASYsUps45H的处理 11

2。2。3。4 连接 11

2。2。3。5 转化 11

2。2。3。6 阳性重组子的筛选 12

2。2。3。7 测序 12

2。2。4 pMGS36H-acroA质粒的获得 12

2。2。4。1 pMG36e载体的处理 12

2。2。4。2连接 13

2。2。4。3 转化 13

2。2。4。4阳性重组子的筛选 13

2。2。4。5 测序及基因的鉴定 14

3。 实验结果与分析