相关研究显示,姜黄素能够诱导永生的小鼠成纤维细胞NIH3T3erbB-2癌基因转导的NIH3T3细胞、小鼠肉瘤S180、人大肠癌细胞HT-29、人肾癌细胞293、人肝癌细胞HepG2细胞的凋亡[15],以及早幼粒白细胞HL-60细胞[16]、B细胞淋巴瘤患者腹水细胞CA46[17]、人乳腺癌细胞MCF-7[18]、鼻咽癌NCE细胞[19]、前列腺PC-3M细胞[20]等细胞的凋亡。其中,姜黄素诱导肝癌细胞凋亡的研究表明,姜黄素能够通过下调bcl-2 及suvrivin蛋白的表达,能够使肝癌细胞在S、G2/M期增多,G0/G1期数量减少,从而阻断了癌细胞的DNA复制、合成,改变细胞膜表面分子的表达,调节生长因子的表达;提高体内活性氧的表达水平,使细胞内的氧化还原失衡,改变线粒体膜电位,从而线粒体的正常功能被破坏;激活caspase蛋白家族中的信号分子,切割完整DNA片段;激活Nrf-2和MAP激酶的表达,抑制磷酸酶的活性;总之,姜黄素通过调节肝癌细胞内的基因蛋白表达及信号传导通路等一系列的作用,诱导细胞凋亡。

可以看出姜黄素在细胞凋亡的作用中起到十分重要的影响,其抗癌的相关实验研究使得姜黄素有可能成为潜在的肝病治疗的新药物,为我国的肝病患者带来福音,实现肝癌研究、治疗领域的一大突破性的跨越,解决肝癌的预防、治疗、预后等相关的问题,采用不同的调控机制、新理念、新技术、新药物应用于癌症的治疗。

本次研究主要阐述姜黄素对HepG2肝癌细胞的毒性、凋亡影响,初步探讨姜黄素对细胞凋亡的机制研究。通过CCK-8法检测姜黄素对HepG2肝癌细胞的毒性影响,Western blot检测PARP蛋白质降解片段的蛋白质水平、caspase-3酶活性水平及JNK与 P-JNK的表达水平,了解姜黄素诱导HepG2肝癌细胞凋亡发生的机制,可能与JNK信号通路有关。

1材料与方法

1.1主要试剂

DMEM培养基(高糖、含有10%胎牛血清、1%谷丙酰胺、1%双抗)购自HyClone公司;PBS缓冲溶液购自碧云天生物技术公司;25%胰蛋白酶、RIPA裂解液、增强型CCK-8试剂盒、彩色预染蛋白质分子量标准均购自碧云天生物技术公司;改良型BCA蛋白浓度测定试剂盒与Caspase-3活性检测试剂盒购自Sangon Biotech生工生物工程公司;PAGE凝胶快速制备试剂盒来自上海EpiZyme科技有限公司;Cleaved PARP兔单克隆抗体、-action兔单克隆抗体、SAPK/JNK兔单克隆抗体、P- SAPK/JNK兔单克隆抗体、HRP-标记的羊抗兔IgG、ECL显影液均来自BIO RAD伯乐生命医学产品(上海)有限公司。

1.2 主要设备

CO2培养箱、超净工作台、电泳仪、恒温混匀仪来自杭州奥盛仪器有限公司、高速离心机购自ThermoFisher 科技有机有限公司、多功能酶标仪(M系列酶标仪SpectraMax M3)、全自动化学成像系统来自上海Tanon公司。

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