兔出血症病毒传统毒株和变异毒株VP60蛋白多克隆抗体的制备及其鉴定(3)
1.1.4 设备
离心机（艾本德公司）；硝酸纤文素膜电转系统（Bio-rad公司)；垂直式电泳槽（bio-rad公司）；超声破碎仪（Scientz-IID）；全自动酶标仪酶联免疫吸附试验检测仪微孔板检测器（Tanon公司)；全自动化学发光成像分析系统（Tanon公司）。
1.2 方法
1.2.1 兔出血症病毒传统毒株和变异毒株VP60蛋白的鉴定
1.2.1.1血凝效价测定
使用血凝反应来测定RHDV2和RHDV VP60蛋白的效价，具体的操作如下：
①现场配制1：100的人O型红血球悬液。
②横置100孔有机玻璃反应板，用多道移液器每孔滴加PBS50 μL，加50 μL抗原样品（反复冻融过的RHDV2和RHDV VP60蛋白悬液）于第一孔中，吹打混匀，注意设置对照孔。
③50 μL于第二孔中，如此同上连续稀释直至第10孔，于第十孔用移液器吸取50μL混合液体弃去。
④每孔滴加50 μL人O型红血球悬液，置于4℃冰箱中反应30-40分钟。
⑤判定结果；
对照孔红细胞将明显的钮扣状沉到孔底可进行判定。
将板倾斜，观察血凝板，判读结果将板倾斜（45度左右），观察血凝板。
判读结果：
＋＋＋＋：红细胞全部凝集，呈红色血点铺于孔底，即100%红细胞凝集。
＋＋＋：红细胞凝集基本同上，但孔底有大圈。
＋＋：红细胞于孔底形成中等大的圈，四周有小凝块。
＋：红细胞于孔底形成小圆点，四周有少许凝集块。
－：红细胞于孔底呈小圆点，边缘光滑整齐，即红细胞完全不凝集。
能使红细胞完全凝集（100%凝集，++++）的抗原最高稀释度为该抗原的血凝效价，此效价为1个血凝单位（HAU）。对照孔应呈现完全不凝集（-），否则此次检验无效。
1.2.1.1 Western-blot分析
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