山东省养殖场禽流感病毒流行病学调查(3)
自AI发现以来，该病给养禽业造成了巨大的经济损失，对人类的健康造成严重威胁[5]。通过采样、分离和鉴定病毒的方法对某地区进行AIV流行病学调查，被证明是一种有效的AI疫情防控手段[6]，这种方法能够实时掌握AIV最新的流行和变异情况，提供科学和及时的决策依据以便更好地制订防控措施。山东省是我国重要的家禽养殖、消费中心区域之一，加强对该区域的AIV流行病学监测有着极其重要的意义。本实验针对2017年1月至3月山东省烟台市和临沂市家禽养殖场送检的病料样品，运用血凝试验和RT-PCR方法对样品进行AIV病原检测，以了解AIV的流行情况，并说明家禽中AIV感染率、亚型分布和流行特点，为制定防制措施提供流行病学信息。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 引物
反转录使用的引物为12bp引物；鉴定使用的引物有：AIV M基因鉴定引物，H5亚型AIV鉴定引物，H7亚型AIV鉴定引物，H9亚型AIV鉴定引物。以上引物均由上海生工生物技术有限公司合成。
1.1.2 主要试剂
主要试剂有ddH2O，Trizol裂解液，氯仿，异丙醇，75%乙醇，DEPC水，2×taq plus master mix酶，反转录试剂盒（Takara公司生产），琼脂糖，TBE，核酸染料，2000 DNA marker，抗凝剂，抗生素，灭菌PBS等。