卵黄抗体IgY已经被确认为多价抗体的上佳来源，并且有望成为哺乳动物蛋白抗体的替代品*吹冰`文~论|文/网www.chuibin.com，进而避免哺乳动物蛋白抗体在临床使用中出现的相关问题。伦理学观点也极其推崇以鸡作为抗体的制备源，由此尽可能替代、减少及精细利用实验动物，以减少对动物的损害。卵黄抗体技术能够在尽量不伤害动物的前提下采集抗体，在维护实验动物福利方面是一大改进。目前，在各种医用抗体领域，鸡源性抗体制备技术因其较传统抗体制备技术具有诸多优点而被广泛采用，如母鸡饲养简单、鸡卵收集方便，无需抽取血液、无损伤，产率高、成本低、稳定性好、特异性强、过敏性小等[6-11]。本研究选用莱航鸡为载体，用蛇毒类毒素免疫并收集鸡卵，旨在研究一种新型鸡源性多价抗蝮蛇毒卵黄抗体，以求对上述广义蝮蛇中的5种（短尾蝮、乌苏里蝮、岩栖蝮、菜花原矛头蝮和原矛头蝮）蛇毒均有解毒效果，从而改善单价马源性抗蛇毒血清的不足，有望为蛇伤患者提供新的治疗药物。

1 材料和方法

1.1材料

1.1.1仪器与试剂

本实验所用仪器：Centrifuge 5810R低温高速离心机（Eppendorf）、Freeze Dry System/Freezone 4.5真空冷冻干燥机（Labconco）、Multipette Xstream电动移液枪（Eppendorf）、SpectraMax 384酶标仪（Molecular Devices）、Mini Protean III system电泳系统（Bio-Rad）Trans-Blot SD半干转印仪论文网（Bio-Rad）、UMAX2100扫描仪(UMAX)、Costar 3590 96孔不可拆酶标板（Corning Incorporated）、截留分子量14K的透析膜（Sangon Biotech）。

本实验所用试剂：弗氏完全佐剂（Sigma-Aldrich）、弗氏不完全佐剂（Sigma-Aldrich）、二抗（HRP-conjugated AffiniPure Donkey Anti-Chicken IgY/IgG，Sigma-Aldrich）；硫酸铵、PEG-6000等其它试剂均为国产。

1.1.2实验用蛇毒及动物

实验用短尾蝮、乌苏里蝮、岩栖蝮、原矛头蝮和菜花原矛头蝮五种蛇毒为实验室自储品。实验用莱航母鸡（20~22周龄）2只购自农贸市场，母鸡运回实验室后用发酵床法单笼饲养于25 oC恒温室，控制室内相对湿度为60 %，光照时间16 h，开启通风设备以确保室内通风畅顺，饲养期间提供足量的饮水和食物并及时更换，在食物中添加适量钙质和维生素以确保母鸡产蛋所需营养。每天检查莱航母鸡是否表现为：鸡冠鲜红、羽毛整齐光亮、两眼明亮、精神活泼、当人靠近时表现比较兴奋、有求食欲以及能对外界刺激能迅速作出反应等特点，以便随时判断实验期间动物的生理状态是否良好。