2。4。4。2 荧光显微镜观察：Hoechst 33342染色

将盖玻片用75%乙醇浸泡后，PBS冲洗2遍，10%胎牛血清的1640冲洗一遍，放置于6孔板中。收集对数生长期CNE-2细胞接种于6孔培养板中，每孔含4×105个细胞。培养过夜，待贴壁生长到铺满培养容器底部80%左右后，200μmol/L GSNO 作用12h，对照组加入同体积的RPMI-1640培养液。吸去培养液，用4%多聚甲醛固定，PBST（含0。1% Tween-20，0。5% Triton100的PBS）洗涤，再加入Hochest 33342室温暗处理20min，用PBST洗涤。封片置于荧光显微镜下观察。激发波长350nm，发射波长460nm。

2。4。5 统计学方法

各组实验数据以（ ±s）表示，应用SPSS15。0进行统计。采用方差分析和t检验进行显著性检验，以P<0。05为差异具有统计学意义。

3 结果与分析来*自~优|尔^论:文+网www.chuibin.com +QQ752018766*

3。1 MTT法检测GSNO对CNE-2细胞增殖的影响

3。1。1 不同浓度GSNO处理不同时间对CNE-2生长增殖的影响

通过使用不同终浓度的GSNO作用于1。0×104个/100μL 的CNE-2细胞，分别处理12h，24h后，利用MTT法检测细胞的生长抑制率。结果表明，GSNO可明显抑制CNE-2细胞的生长增殖，其效果与作用时间和浓度相关（图1）。如表1所示，同一作用时间内，GSNO处理24h，对细胞生长的抑制率随GSNO剂量的增加而上升（P<0。05）；200 μmol/L GSNO作用CNE-2细胞，12h抑制率为19。1%，24h抑制率为30。4%，呈时间梯度变化。