620nm

660nm

440nm

460nm

590nm

520nm

1.1.3  试管苗继代扩繁

将继代马铃薯组培苗去根切取为含有两叶左右的茎段接种于壮苗培养基中。接种时每瓶接种7个茎段。先黑暗处理,一段时间后,再用15±5μmol·m-2·s-1光密度进行光照培养。

1.2  方法

1.2.1  不同光谱条件下培养

将生长健壮的马铃薯组培苗去根切取为含有两叶的茎段接种于结薯培养基中。接种时每瓶接种7个茎段。将接种好的材料随机地置于温度(18±2)℃;8h/d光照,16h/d黑暗光周期,不同光谱条件下试验:R(620nm);R(660nm);B(440nm);B(460nm);Y(590nm);G(520nm)。90d后分析马铃薯试管薯成薯的形态指标和生理指标,从而研究不同光谱对马铃薯试管薯成薯的影响。

1.3  形态及生理指标测定

1.3.1  形态指标测定

每瓶结薯株数、每瓶结薯数、每株结薯数、单薯重、每瓶总薯重、单薯直径、诱薯率、不同克数范围结薯数及其比率(<0.05g结薯数、0.05-0.1g结薯数、0.1-0.2g结薯数、0.2-0.3g结薯数、>0.3g结薯数及其各自比率)。测定时对于各处理样本,均采用随机取样,每个处理三次重复。

1.3.2  生理指标测定

可溶性糖含量测定:蒽酮比色法测定可溶性糖,根据公式可得:可溶性糖含量(%)={[c×(V/a)]/w×106 }×100% [c—从标曲查得葡萄糖μg值;V—样品提取液总体积(ml);a—显色时取样品液量;w—样品重(g)][20]。

淀粉含量测定:蒽酮比色法测定淀粉含量,淀粉含量(%)={[c×(V/a)×0.9]/w×106} ×100%[21]。

可溶性蛋白质测定:考马斯亮蓝法测定可溶性蛋白含量,可溶性蛋白质含量 (mg·g-1)=[C×V1×N]&pide;[V2×W×103](C—查标准曲线值(μg);V1—提取液总体积(mL);V2—测定时加样量(mL);W—样品鲜重(g);N—稀释倍数)[22]。

蔗糖含量测定:蒽酮比色法测定蔗糖含量,取除去蛋白质的沉淀,置于10ml离心管中,后加入6mol/L的盐酸1ml,摇匀,在沸水浴中加热10min,冷却后滴加酚酞指示剂一滴,以10%氢氧化钠溶液中和至溶液呈微红色,然后按蒽酮比色法测定可溶性糖的方式,根据公式:可溶性糖含量(%)={[c×(v/a)]/w×106 }×100% [c—从标曲查得葡萄糖μg值;v—样品提取液总体积(ml);a—显色时取样品液量;w—样品重(g)][20]。这个可溶性糖包括蔗糖的全糖含量,因此减去原有的可溶性糖的含量,剩余的即是蔗糖含量。

1.4  数据分析

所有数据均采用Excel软件对数据进行统计分析,并采用SPSS检测其各指标的差异显著性(P<0.05)及标准误差。

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