食物及饮水中亚硝酸盐含量的分析研究(4)
催化分光光度法由于灵敏度高、选择性好、试剂消耗量少等优点，适用于饮用水及食品中痕量亚硝酸盐的含量测定。其原理是在一定的温度和酸性条件下，亚硝酸盐对溴酸钾氧化指示剂而褪色的反应具有比较明显的催化作用，在一定的线性范围内，亚硝酸盐的浓度与吸光度成较好的线性关系。有学者利用硫酸介质中亚硝酸盐对溴酸钾氧化结晶紫的催化作用，建立了室温下反相停留流动注射催化动力学光度法[7]测定自来水及食品中微量亚硝酸盐的含量。
传统的分光光度法测定亚硝酸盐含量时检出限较高，就无法测定部分海洋表层及寡营养盐海域的低浓度亚硝酸盐的含量。而化学发光法恰恰由于它的低检出限、样品用量少、不受悬浮颗粒物和有色物质影响等优点能对其进行亚硝酸盐含量的测定。测定亚硝酸盐的化学发光法通常有两种：荧光法和鲁米诺化学发光法[8]。前者是基于亚硝酸盐对于氧化还原反应的催化作用，使指示物质的荧光强度变化，且这种强度的改变在一定范围内与亚硝酸盐的浓度呈线性关系。后者在酸性条件下，鲁米诺与亚硝酸盐发生重氮化反应，生成重氮化鲁米诺，它与过氧化氢反应可产生增敏的化学发光信号，增敏信号与亚硝酸盐浓度在一定范围内呈线性关系。
1.2.2 色谱法
色谱法是利用样品中不同组分与固定相和流动相之间的相互作用力的差别，当两相作相对移动时，各组分在两相间进行多次平衡，达到相互分离。常见的方法有离子色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法。
离子色谱法是通过纯水萃取食品中的亚硝酸盐和硝酸盐，经过煮沸、冷冻、过滤对其进样测定[9]。本法适用于测定蔬菜中亚硝酸盐含量。而对于含有其他成分如色素、动物性蛋白的样品，高效液相色谱法是不错的选择。液相色谱和连续流动分析与格里斯试剂法相结合，拓宽了亚硝酸盐测定的样品多样性，使其能够测定一些复杂样品（如生物液体）中亚硝酸盐含量。Kazemzadeh[10] 等就曾使用连续流动分光光度法同时测定多种样品中的亚硝酸盐含量。此外，气相色谱法对于测定亚硝酸盐也有着一定作用。在硫酸介质中，亚硝酸盐与环乙基磺酸钠反应生成环乙醇亚硝酸钠，环乙醇亚硝酸钠在常温下呈气态，顶空进样，用FID检测器进行检测，从而测出样品中亚硝酸盐含量。
1.2.3 电化学法
电化学分析法具有仪器简单，操作方便，分析速度快等特点，近年来，在测定亚硝酸盐领域越来越受到重视。
示波极谱法是新的极谱技术之一，其测定原理是将样品经沉淀蛋白质，去除脂肪后，在弱酸性条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，在弱碱条件下再与8-羟基喹啉偶合成橙色染料，该偶合染料在汞电极上还原产生电流，电流与亚硝酸盐浓度呈线性关系。之后又对此法做了改进：采用对-蔷薇苯胺(品红)的亚硝酸盐溶液[11]进行偶合反应，此偶氮化合物具有非常灵敏的极谱波，易于检测。
有些学者还研究了在酸性介质中以玻碳电极为工作电极的铁氰化钾电催化还原亚硝酸盐的电化学行为及电分析方法[12]，得到的结果也是很令人满意的。
1.2.4 毛细管电泳法
毛细管电泳法具有分离效率高、分离速度快、样品用量少及分析化合物种类广泛等特点。Merusi等[13]利用毛细管电泳法同时测定硝酸根、 亚硝酸根和草酸根的新方法。采用熔融石英毛细管柱作为分离通道，以50μM磷酸盐（pH=2.5）作为运行缓冲液，运行电压25kV，毛细管柱温为25℃，检测波长为214nm，进样压力为3.5kPa，外标法定量测定。
基于三点原因：其一，化学发光法、毛细管电泳法和色谱法等都对测定的仪器具有比较高的要求，就实验条件而言，通过这几种方法达到预计效果的可能性较低；其二，由于电化学法的进行离不开电极，而实验中需要用到的固体电极则需要较高的过电位才能实现亚硝酸盐的氧化还原；其三，由于分光光度法需要的仪器设备简单，操作性强，实验的准确性和灵敏度也比较高，一直以来被广泛使用，如今也已发展的相对成熟。而就盐酸萘乙二胺法和格里斯试剂法的选择，由于之前已有学者进行了研究，发现添加高标量亚硝酸盐时，两者回收率无明显差别，但随着加标量的减少，后者的回收率明显低于前者；且无论是样品的前期处理还是显色方法上，前者都明显优于后者[14]。