Au微粒在TNNI3K检测中的应用(2)
1.5 本课题研究内容和研究意义 5
1.5.1 研究内容 5
1.5.2 研究意义 6
2 实验部分 7
2.1 实验仪器与试剂 7
2.1.1 实验仪器与材料 7
2.1.2 实验试剂 7
2.2 工艺流程 8
2.2.1 硝酸纤文素膜的预处理 8
2.2.2 胶体Au的制备 8
2.2.4 胶体Au标记二抗 8
2.2.5 试剂盒的组装 9
2.2.6 一抗的包被 9
2.2.7 封闭 9
2.2.8 TNNI3K抗原浓度的检测 9
2.2.9 灰度值的测定 9
2.3 试剂盒工艺条件选择 10
2.3.1 硝酸银浓度对银染的影响 10
2.3.2 一抗浓度选择 10
2.3.3 胶体Au标记二抗的最佳条件选择 10
2.3.4 加入Au-二抗之后清洗次数对灰度的影响 10
2.3.5 RE-Au微粒的银染效果 10
2.3.6 RE-Au混合比例的确定 11
2.4 表征 11
2.4.1 胶体Au的UV-Vis吸收光谱的测定 11
2.4.2 Au-二抗的UV-Vis吸收光谱和IR的测定 11
2.4.3 TNNI3K浓度的检测试剂盒（Au）的IR的测定 11
2.4.4 RE微粒的UV-Vis吸收光谱的测定 11
2.4.5 RE-Au微粒的UV-Vis吸收光谱的测定 12
3 结果与分析 13
3.1 工艺条件选择 13
3.1.1 硝酸银浓度的选择 13
3.1.2 一抗浓度对灰度值的影响 13
3.1.3 胶体金标记二抗条件的选择 14
3.1.4 加入Au-二抗之后清洗次数对灰度的影响 15
3.1.6 RE-Au微粒的银染效果 15
3.1.7 RE-Au混合比例的确定 16
3.2 表征 18
3.2.1 胶体Au的UV-Vis吸收光谱 18
3.2.2 Au-二抗的UV-Vis吸收光谱和IR 19
3.2.3 TNNI3K浓度的检测试剂盒（Au）的IR 20
3.2.4 RE微粒的UV-Vis吸收光谱 22
3.2.5 RE-Au微粒的UV-Vis吸收光谱 23
4 结论 25
致谢 26
参考文献 27
1 引言
1.1 免疫检测技术
在医学研究中，通过免疫检测技术利用已知抗体检测未知抗原，在该方法中作为分析试剂的已知抗体可以是一种，也可以是多种，既可以定性的检测未知抗原，也可以定量的检测未知抗原。免疫检测技术基本原理是抗体和抗原之间的相互作用，关键技术是抗原和抗体之间反应的特异性和灵敏性[1]。
免疫检测技术是一种广泛应用在生物分析检测领域的方法，最早被引入化学分析界，是在1959年美国物理学家Yallow和Berson，利用放射免疫检测法（Radioimmunoassay RIA）检测血清中的胰岛素的检测中[2]。此外免疫检测技术具有特异性强、操作相对简单、灵敏度高等优点，因此在环境卫生、食品安全及临床检测等领域中应用十分广泛。
免疫检测技术分为两种：标记免疫分析检测技术和非标记分析免疫检测技术。标记免疫分析检测技术依据标记示踪物的不同，划分为酶免疫分析检测、放射免疫分析检测和其它免疫分析检测技术（荧光免疫检测技术、胶体金免疫检测技术和发光免疫检测技术等）。自二十世纪七十年代以来，很多灵敏度高的检测分析方法应用于临床免疫学检测，其中酶联免疫吸附法是最早使用以及应用最广的传统方法之一。随着免疫检测技术不断快速的发展，其已经成为一个多学科交叉的新型分析技术，结合其他的分析方法，形成很多种新的分析方法[3]。