Au微粒在TNNI3K检测中的应用(3)
1.2几种常用免疫方法
1.2.1 酶联免疫诊断技术
1971年酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）首次被发明。这种方法的基本原理是先使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其生物活性，然后将抗原或抗体与某种酶结合成酶标抗原或抗体，在测定时，把待测标本和酶标抗原或抗体按照不同的步骤与固定在固相载体表面的抗原或抗体发生免疫反应[4]。实验中，用洗液多次洗涤，使得游离未结合的物质与固相载体上形成的抗原抗体复合物，然后加入一定量的底物，固定的酶将底物催化形成有色产物，这种产物的量与样品中受检物质的量具有一定比例的关系，故可根据颜色深浅可对结果进行定性或者定量判断。由于酶的催化效率较好，因而可极大地使得反应效果进行放大，最后使测定方法达到很高的敏感度。ELISA方法可用于测定抗原，也可用于测定抗体。依据检测目的和操作方法的不同，用于检测抗原的技术可以分为：双抗体夹心法、双位点一步法和竞争法；用于检测抗体的技术有：间接法、双抗原夹心法和竞争法。一般来说，在这种测定方法中必须有3种重要的试剂：一是固相的抗原或抗体，二是用某种酶标记的抗原或抗体，三是可以与酶很好作用的底物。实际研究生产中，可以根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，设计出不同类型的检测方法。
1.2.2 放射免疫分析
基于竞争性结合的原理，通过放射性同位素标记抗原（或者抗体），然后与相应的特异性抗体（或抗原）免疫结合，最后通过测定抗原-抗体结合物的放射活性判断实验结果。这种技术将放射性核素具有的较高灵敏度和抗原-抗体反应的特异性相结合，从而使得检测的灵敏度可以达到pg级水平。这种方法可进行超微量分析，由于其敏感性高，所以可用于测定抗原、抗体、抗原-抗体复合物。在免疫反应中，被放射性元素标记了的抗原和没有被放射性元素标记的抗原都会与特异性抗体进行免疫反应，在该免疫反应中，因为抗体的量有限，所以被放射性元素标记了的抗原和没有被放射性元素标记的抗原之间会形成一种竞争反应，因此，形成的免疫复合物，一种还有放射性元素，一种则没有。因为加入的放射性元素标记的抗原和抗体的量是恒定的，所以一旦它们之间的反应达到动态平衡，若未标记抗原量增多，那么生成的免疫复合物就会增多，生成放射标记免疫复合物的量相对就减少，游离的标记抗原就会增多，所以未标记抗原与复合物的放射性成反比，反应达到平衡后，用有效技术分离复合物和抗原，测定放射性复合物的放射程度，就可以求得样品中的抗原量。
1.2.3 化学发光免疫分析
化学发光免疫分析技术又叫化学发光标记免疫分析，该免疫技术由发光系统和免疫系统两部分组成，在该免疫分析技术中，通常是在抗原或者是抗体上直接标记化学发光剂，亦或是将发光物质直接作用于发光底物上。通常使用的化学发光物质主要有吖啶酯和鲁米诺，在标记抗原或抗体后，进行免疫反应，基本原理是，化学发光物质在反应剂地激发下，由稳定的基态转化成激发态中间体，激发态处于不稳定状态，当由不稳定的激发态转回到稳定的基态时，发射出光信号，当自动发光分析仪接受到光信号时，通过测定光强度，定量的测定出待测样品中抗体或者是抗原的含量。这种方法的灵敏度高于放射免疫测定法，常常用于血清超微量活性物质的测定。
常用于标记的化学发光物质是吖啶酯类化合物。化学发光免疫分析技术的特点是化学反应简单、快速、不需要催化剂。