金纳米粒子检测粘多糖初步探索(2)
2.2 所需溶液的配制表 2-1 所需溶液的配制名称 溶质 溶剂 pH 值 浓度 过滤 注意事项磷酸缓冲溶液 磷酸氢二钠 水 5 5.0 mM 是 无HS-PEG-COOH HS-PEG-COOH 水 无 2.0 mM 否 避光摇匀BSA BSA pH5 5.0 mM 磷酸缓冲溶液无 1 mg/mL 否 无2.3 金颗粒的制备与优化2.3.1 柠檬酸钠还原法准确取492 μL 0.203 mM HAuCl4.3H2O到三颈烧瓶中，并加入100 mL 水。油浴加热到 100℃，稳定10 min。快速加入4 mL 170 mmoL.L-1二水合柠檬酸三钠，加热搅拌40 min 后搅拌冷却。自然冷却冷却至室温，然后取2.0 mL测其紫外。控制其他变量改变还原剂的加入量，优化金颗粒。
2.3.2 水浴法准确取 29.00 μL 0.203 mM HAuCl4.3H2O 加入 30 mL 水中水浴搅拌（1%HAuCl40.2 mL)，再加入 0.64 mL1.15%二水合柠檬酸钠，最后加入新配 0.08% NaBH4 0.32 mL(用 1%柠檬酸三钠溶）,保持温度为 22℃，反应约 20 min。维持柠檬酸三钠加入量以及 HAuCl4浓度改变反应温度，测量金颗粒的UV。探索更佳的实验条件。通过改变加热方式以及温度，来探索更佳的优化条件。
2.4 配体交换把玻璃试管裹上锡纸避光，2 mM HS-PEG-COOH 与 AuNPs 体积 1:1滴加，用微量枪边超声边加入，分 3次，每次间隔 5 min，室温下避光用样品混合器摇匀4 h。2.5 透析先对透析袋进行处理。使用前处理。将透析袋剪成适当长度（10-20 cm)的小段，在大体积的 2%（W/V)碳酸氢钠和 1 mmoL/L EDTA(PH8.0）中将透析袋煮沸10 min，用蒸馏水彻底清洗透析袋，放在1 mmoL/L EDTA(PH8.0)中将透析袋煮沸 10 min，冷却后，存放于 4 ℃的冰箱中，必须保证透析袋始终浸没在溶液内，从此时起取用透析袋必须带手套的，用前在透析袋内装满水然后排出，将之清洗干净。请将清洗后的透析袋淹没在蒸馏水中冷藏带二次用。可将透析袋存放于10-29℃，每次使用后将余下的膜放回袋子并密封好，以防干燥。取 500 mL pH=5.0 5 mM 磷酸缓冲溶液到 500 mL 的烧杯中，首先将透析袋弯折用透析夹夹住，然后将配体交换后的溶液倒入截留分子量为 8000-14000的透析袋，放在磁力搅拌器上，保证透析袋可以旋转起来。2.6 蛋白的固定取透析过的 AuNPs-S-PEG-COOH 分成两份，各约 10 mL，分别加入 50 μLEGF和FGF。 EGF和FGF要分别存放于冷藏中。 称取0.25 mg的EDC用冷pH5.05 mM 磷酸缓冲溶液溶解，室温摇匀 30 min 后各加入含 0.25 mg EDC 的溶液，