低剂量吡蚜酮胁迫下黄金菊氧化应激反应研究(4)
（四）本课题应解决的问题
不同逆境条件下活性氧的产生被认为是重要的适应性反应之一[9]。生物体内活性氧的水平主要依赖于胁迫强度和细胞内的生理状况(如植物细胞的抗氧化能力、氧化还原势的大小和PH等)[10]。
现有研究报道防治农田有害生物的正常农药剂量能对其非靶标生物，如植物产生毒害作用，从而引起植物生长不良、植株体内酶活性的变化[30]等，但是，低剂量农药是否会引起植物的毒害作用研究未见报道，本文就低剂量吡蚜酮胁迫下黄金菊各种保护酶活性的变化及丙二醛积累进行测定，研究黄金菊对吡蚜酮胁迫的应激反应。
二、材料与方法
（一）供试材料
实验植物为黄金菊，在生态学院植物园自然培养。
（二）农药及供试药剂
1、农药
吡蚜酮(Pymetrozine) ：由上海园林研究所提供。试验中采用浓度为：0.0001、0.001、0.01、0.1、0.2、0.4、0 ppm
2、测试仪器及试剂盒
过氧化氢酶(Catalase CAT)测定试剂盒（可见光法，南京建成生物工程研究所）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）测试盒（羟胺法，南京建成生物工程研究所）及丙二醛（MDA）测试盒（TBA法，南京建成生物工程研究所）。
UV2550型紫外分光光度计(日本岛津，Shimadzu公司)。
（三）实验方法
1、黄金菊的处理
分别采用浓度（ppm）为0.0001、0.001、0.01、0.1、0.2、0.4的吡蚜酮农药液喷施黄金菊植株。分别于处理后1、2、3、4、5及6d取样测定。用清水喷施的黄金菊植株作对照，设3次重复。
取样方法：用剪刀剪取适当叶片，并将其剪碎后称重，等待研磨提取酶液。
2、 酶液提取
参照试剂盒说明书上的样本前处理方法。
（1） SOD活性测定样品提取
准确称取植物组织重量（g）：（0.1mol/l，ph=7-7.4）磷酸盐缓冲液（ml）=1：4（实际操作0.2g：0.8ml），冰水浴条件下，充分研磨，制备成20%的匀浆液。
迅速冷却离心10 min(4 000 r／rain)，取上清液进行测定。
（2） MDA含量测定样品提取
准确称取植物组织重量（g）：（0.1mol/l，ph=7-7.4）磷酸盐缓冲液（ml）=1：4（实际操作0.2g：0.8ml），冰水浴条件下，充分研磨，制备成20%的匀浆液。
迅速冷却离心10 min(4 000 r／rain)，取上清液进行测定。
（3） CAT活性测定样品提取
准确称取植物组织重量（g）：生理盐水（ml）=1：9，冰水浴条件下，充分研磨，制备成10%的匀浆液。
迅速冷却离心10 min(2500 r／rain)，取上清液，再用生理盐水稀释成最佳取样浓度，进行测定。
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