富氢水对油菜幼苗耐盐性的影响及其机理研究(4)
抗坏血酸过氧化物酶（APX）活性测定：称量约0.2 g一定质量的叶片样本于预冷的研钵中，加入10 ml预冷的磷酸缓冲液研磨成匀浆，4000 r/min冷冻离心10分钟，取上清液即为APX提取液。分别取APX提取液和空白对照溶液各0.2ml，加入1 ml 50 mmol/L磷酸缓冲液、1ml 100 µmol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）溶液、0.1 ml 5 mmol/L抗坏血酸（ASA）溶液、0.1 ml 20 mmol/L过氧化氢（H2O2）溶液，混匀后计时反应，取溶液测定其在波长290 nm处的吸光度（A）值。根据吸光度差值计算出样本的抗坏血酸过氧化物酶活性[26]。
谷胱甘肽还原酶（GR）活性测定：称量约0.2 g一定质量的叶片样本于预冷的研钵中，加入10 ml预冷的磷酸缓冲液研磨成匀浆，4000 r/min冷冻离心10分钟，取上清液即为GR提取液。分别取GR提取液和空白对照溶液各0.2ml，加入1 ml 50 mmol/L磷酸缓冲液、1 ml 100 µmol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）溶液、0.1 ml 10 mmol/L氧化型谷胱甘肽（GSSG）溶液、0.1 ml 2.4 mmol/L NADPH溶液，混匀后计时反应，取溶液测定其在波长340 nm处的吸光度（A）值。根据吸光度差值计算出样本的过谷胱甘肽还原酶活性[27]。
（7）过氧化氢（H2O2）含量测定
称量约0.5 g一定质量的叶片样本于预冷的研钵中，加入5 ml预冷的10%三氯乙酸溶液研磨成匀浆，12000 r/min冷冻离心15分钟，取上清液即为过氧化氢提取液。分别取过氧化氢提取液及不同浓度的标准过氧化氢溶液各0.5 ml，加入0.5 ml 0.1mol/L磷酸钾缓冲液、1 ml 1mol/L碘化钾（KI）溶液，混匀后置于黑暗条件下反应1小时，取溶液测定其在波长390 nm处的吸光度（A）值。根据吸光度绘制标准曲线并计算出样本的过氧化氢含量[28]。
（8）丙二醛（MDA）含量测定
称量约0.2 g一定质量的叶片样本于研钵中，加入10 ml 10%三氯乙酸溶液研磨成匀浆，4000 r/min离心10分钟，取上清液即为丙二醛提取液。分别取丙二醛提取液和空白对照溶液各5 ml，加入5 ml 0.6%硫代巴比妥酸(TBA)溶液，沸水浴30分钟，冷却后4000 r/min离心10分钟，取上清液测定其分别在波长450 nm、532 nm、600 nm处的吸光度（A）值。根据吸光度计算出样本的丙二醛含量[29]。
（9）相对电导率（Relative conductivity）测定
使用电导仪测定植物叶片的相对电导率。
（10）Na+、K+离子含量的测定
用20 mM EDTA-Na2浸泡植株30 min，去离子水冲洗干净。将植株分为叶、秆和根三部分烘干，分别称取干样 0.2 g放入洗净烘干的消煮管中，加入HNO3–HClO4（V:V=87:13）混合液5 mL，12 h后置于电热消煮仪（Milestone Ethos T, Italy）上进行消煮。待消煮完成后，用2.5% HNO3定容至10ml，用ICP（ Perkin Elmer Optima 2100DV）测定溶液中Na+、K+离子含量。
1．3 数据处理
使用Microsoft Office Excel 2010进行数据整理和计算，使用IBM SPSS Statistics 20进行显著性差异分析，使用GraphPad Prism 6、Origin 8.1进行图表制作