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大肠杆菌可诱导性前噬菌体宿主谱改造试验(3)
1.4.2噬菌体基因组和细菌基因组的提取
噬菌体基因组提取方法采用艾比根生物技术公司的噬菌体基因组提取试剂盒的说明书内容,如下:
(1)将噬菌体增殖后的滤液分装到1.5 mLEP管中,向滤液中加入终浓度为0.5%的氯仿,充分翻转震荡摇匀,使噬菌体被完全释放。在3,000×g,离心10 min,除去细菌碎片。
(2)小心地取出上清,放入新的50mL离心管,加入DNaseI和RNaseA(Thermo),至终浓度为1μg/mL,37 ℃水浴30min。
(3)加入预冷的噬菌体沉淀液(PEG溶液,为1M/L的NaCl溶液中加入20%-30%的PEG8000),混匀后于4℃放置半小时使噬菌体沉淀。
(4)转速12,000× g,离心10 min,弃去上清,吸去多余液体,使沉淀下来的噬菌体充分干燥。
(5)加入500μL裂解液,重悬后充分混匀,加入100 μL20%的SDS,颠倒混匀后置于70 °C水浴锅内孵育10 min,然后置于冰上冷却。
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