2.4重组酶LamC的诱导表达
将表达菌株Origami 2(DE3)-pET 32a-lamC划线活化,接种单菌落于含有100mg/mL氨苄霉素(Amp)的3mL液体LB培养基中,37°C,180rpm振荡过夜。取1mL菌液转接于100mL液体LB培养基(含100mg/mLAmp),37°C,180rpm培养至OD600为0.6左右,加入1M IPTG20μL,18°C,180rpm培养24h,8000rpm离心12分钟,弃去上清。沉淀用pH7.0 Tris-HCl将菌体吹悬,超声破碎后,12000rpm,4°C离心20分钟,收集上清。
2.5重组酶LamC的纯化
Ni 2+ -NTA 亲和层析柱预先以两倍柱体积的20 mMTris•HCl(pH 7.0)平衡,将含有重组酶LamC的破碎液离心上清上样至Ni 2+ -NTA亲和层析柱,4 ℃孵育 1 hr,以5倍柱体积含50 mM咪唑的20 mMTris•HCl(pH 7.0)洗去杂蛋白,然后以含100mM、200 mM、300 mM咪唑的20 mMTris•HCl(pH7.0,)缓冲液进行分步洗脱2倍柱体积,收集洗脱液,进行12% SDS-PAGE电泳进行纯度检测。
2.6重组酶LamC的SDS-PAGE检测
上一篇:粪产碱杆菌NicA基因的烟酸降解功能鉴定
下一篇:不同产地连钱草的药用品质综合评价的研究

分子量可控酵母β-葡聚糖的制备和活性评价

里氏木霉中木聚糖酶基因的克隆

产木聚糖酶里氏木霉的ARTP诱变育种

黑曲霉产木聚糖酶的发酵条件的优化

里氏木霉木聚糖酶基因x...

里氏木霉产木聚糖酶发酵条件优化

黑曲霉木聚糖酶基因在马...

压疮高危人群的标准化中...

上海居民的社会参与研究

基于Joomla平台的计算机学院网站设计与开发

浅论职工思想政治工作茬...

从政策角度谈黑龙江對俄...

提高教育质量,构建大學生...

酵母菌发酵生产天然香料...

浅谈高校行政管理人员的...

AES算法GPU协处理下分组加...

STC89C52单片机NRF24L01的无线病房呼叫系统设计