溶藻菌短短芽孢杆菌B15的发酵条件优化(3)
· s-1
，
温度为 25℃，每天定时摇晃 3 次。
1.2.2 铜绿微囊藻的计数及其生长曲线的测定
将指数生长期的藻种加 BG11培养基稀释至初始浓度为 8×105
•mL-1
，按上述条件培
养，每 3 天取样，通过血球计数板计数，绘制生长曲线图。
1.2.3 细菌的培养及细菌无菌滤液的制备
将 B15 接种于液体牛肉膏蛋白胨培养基中，30℃、200 rpm 摇床培养 12 h 后将种子
菌悬液按 1%的比例转接于新鲜的液体培养基中， 再培养 48 h， 获得细菌发酵液。 8000 g，
4℃下离心 10 min去菌体，使用 0.22 µm 无菌滤膜将上清液过滤除菌，获得抑藻细菌无
菌滤液即为无菌滤液。
1.2.4 抑藻菌株对铜绿微囊藻生长的影响
取指数生长期铜绿微囊藻计数后，加入 BG11 培养基稀释成浓度为 1.0×106
•mL-1
的藻液。制备无菌滤液，并按 1%的比例添加到 20 mL 初始浓度为 1.0×106
•mL-1
的藻液
中进行抑藻实验，取等量未作处理的藻液作为对照组，光照培养箱培养 4 天，用流式细
胞仪进行计数，并计算抑藻率。
铜绿微囊藻的抑藻率定义为：抑藻率（%）=（Nc-Nt）/ Nc×100%
Nc 代表对照组 M. aeruginosa 浓度（cells/mL），Nt 代表处理组 M. aeruginosa 浓度
（cells/mL）。
1.2.5 测定不同碳源对 B15 溶藻效果的影响
以蛋白胨（10 g•L-1
）作为氮源，加入5 g•L-1
NaCl 以及 10 g•L-1
不同碳源（蔗糖、
麦芽糖、淀粉、麸皮和酵母提取物）制备 5 种碳源培养基，按上述方法制备无菌滤液。
将各种无菌滤液按体积比 1%的比例加入到 20 mL起始浓度为 1.0×106
•mL-1
藻液中，取
等量未作处理的藻液作为对照组，每组平行 3 个，置于光照培养箱中培养 4 天，每天摇
晃三次。测量并计算抑藻率，通过比较确定出对菌株 B15 溶藻效果最佳的碳源。
将最佳碳源按不同质量浓度（5、10、15、20、25 g•L-1
）测定菌株 B15 溶藻效果的
影响，确定出最佳的质量浓度。
1.2.6 测定不同氮源对菌株 B15 溶藻效果的影响
NaCl 的用量不变，在确定出最佳碳源及其最佳质量浓度的基础上，进一步研究添
加 10 g•L-1
不同氮源（蛋白胨、硫酸铵、硝酸钾、酵母提取物、牛肉膏、尿素、玉米面
和黄豆粉）对菌株溶藻效果的影响。按体积比 1%比例将制备好的 8 种无菌滤液加入到
20 mL起始浓度为 1.0×106
•mL-1
藻液中，取等量未作处理的藻液作为对照组，每组平行
3 个，置于光照培养箱中培养 4 天，每天摇晃三次。测量并计算抑藻率，通过比较确定
出对菌株溶藻效果最佳的氮源。
将最佳氮源按不同质量浓度（5、10、15、20、25 g•L-1
）测定菌株 B15 溶藻效果的
影响，确定出最佳的质量浓度。
1.2.7 培养基优化正交试验
根据上述培养基成分单因子试验结果，选取 NaCl 与上述测定出来的最佳碳源及氮源，将这些元素进行三个水平的正交试验。选出溶藻效果达到最佳的培养基组合。根据
正交试验分析，选取培养基配方和最佳培养基组合进行发酵试验，最终确定最优培养基
组合。
1.2.8 培养条件的单因子试验
采取上述测定的优化培养基配方， 分别研究菌株 B15溶藻效果达到最佳时的培养温
度、培养基初始 pH值、摇床转速、接种量和装液量。
1.2.8.1 培养温度
25℃、28℃、30℃、33℃、35℃、37℃下 200 rpm 培养 48 h，制备无菌滤液，按体
积比 1%比例加入到 20 mL 起始浓度为 1.0×106