3730型DNA测序仪测序过程中,模板的纯度和浓度、引物和测序循环反应条件都会对测序结果产生重要影响[2~4]。有研究表明,测序成功的关键是测序模板的纯度,大多数测序失败都是由于模板纯度不够所致[5]。应该使用质量可靠的试剂盒,即可保证模板质量。在设计测序引物时,除了要遵守一般的引物设计原则外,要特别注意引物的长度不能过长,这样不仅可以控制引物的Tm值,还可以降低引物的合成成本。测序反应条件的优化可以使测序反应适用于不同的模板,获得稳定的测序结果。乙醇沉淀法方便、快速、经济,是首选的纯化方法[5]。虽然目前对测序质量影响因素的研究有很多,然而对样品板和测序胶保存时间影响测序结果的研究还鲜有报道。

本研究在熟悉3730测序仪工作原理与特点的基础上,分析了该仪器测序过程中样品和测序胶保存时间对测序质量的影响,为进一步提高DNA测序的成功率及准确性提供实践参考。

2  材料与方法

2。1  主要仪器设备文献综述

(1)3730Xl DNA测序仪(Applied Biosystems)

(2)离心机(cence湘仪L550)

(3)PCR仪(PTC-100)

(4)移液器(Labnet®)

(5)96孔样品板(Applied Biosystems)

(6)96孔橡胶垫(Applied Biosystems)

(7)96孔样品板基座(Applied Biosystems)

(8)96孔上盖(Applied Biosystems)

(9)ATF分析软件(Conexio GENOMICS,Wesrern Australia)

(10)Graphpad6。0医学绘图软件

(11)超纯水仪

2。2   主要试剂

(1)10× Buffer(Applied Biosystems)

(2)超纯水 

(3)POP-7 Polymer (Applied Biosystems) 

(4)Hi-Di Formamide(Applied Biosystems) 

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