1．2．4  热激法转化大肠杆菌感受态    取100μL（1管）感受态菌液，放在冰上慢慢融化。取5μL连接产物，加入到融化的感受态细胞中，冰浴30min，42℃水浴1min30s，立即转入冰上冷却3min，加入600μL无抗性LB液体培养基，37℃，180rpm/min摇床震荡培养50min。4000rpm 离心3min，倒出上清，将剩余菌体重悬，均匀涂布抗性LB固体培养基，37℃过夜培养。10-12h后对长出的单克隆菌落进行鉴定。
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