细菌硫酸软骨素类发酵工艺条件研究(2)
2.5.2.1菌落形态观察 8
2.5.2.2 细菌形态观察 8
2.5.2.3 革兰氏染色 9
2.5.2.4 芽孢染色 9
2.5.2.5荚膜染色 10
2.5.2.6 乙酰甲基甲醇实验 （V.P） 10
2.5.2.7甲基红实验（M.R) 10
2.5.3 种子液的培养 10
2.5.4 菌株生长曲线的测定 10
2.5.5 多糖含量的测定 11
2.5.5.1 葡萄糖醛酸标准曲线的测定 11
2.5.5.2 多糖含量测定方法 11
2.5.6 发酵液黏度测定 11
2.5.7 菌体浓度的测定 11
2.5.8 发酵培养基的单因素优化实验 12
2.5.8.1 不同碳源种类的优化 12
2.5.8.2 蔗糖浓度的优化 12
2.5.8.3 不同氮源种类的优化 12
2.5.8.4 酵母膏浓度的优化 12
2.5.8.5 蛋白胨浓度的优化 12
2.5.8.6 酵母膏、蛋白胨比例的优化 12
2.5.8.7 不同无机盐种类的优化 12
2.5.9 发酵条件的单因素优化实验 13
2.5.9.1 装液量的优化 13
2.5.9.2 接种量的优化 13
2.5.9.3 发酵温度的优化 13
2.5.9.4 转速的优化 14
2.5.10 正交法对发酵培养基的优化 14
2.5.11 5L发酵罐扩大培养 15
2.5.12 胞外多糖提取工艺建立 15
3. 结果与讨论 15
3.1 菌株的生理生化鉴定 15
3.1.1 菌落形态观察结果 15
3.2 生长曲线的测定 17
3.3 D-葡萄糖醛酸标准曲线的绘制 17
3.4 发酵培养基的优化 18
3.4.1 不同碳源的优化 18
3.4.2 蔗糖浓度的优化 19
3.4.3 不同氮源的优化 20
3.4.4 酵母膏浓度的优化 20
3.4.5 蛋白胨浓度的优化 21
3.4.6 酵母膏蛋白胨比例的优化 21
3.4.7 无机盐种类的优化 22
3.5 发酵条件的优化 22
3.5.1 装液量的优化 22
3.5.2接种量的优化 23
3.5.3 发酵温度的优化 23
3.5.4 转速的优化 24
3.6 正交法对发酵培养基的优化 24
3.7 5L发酵罐扩大培养 25
4. 结论 27
致谢 28
参考文献 29
1. 绪论
1.1 硫酸软骨素概述
硫酸软骨素(Chondroitin Sulfate，CS)广泛存在于动物组织中，是一种从动物软骨中制备而得的酸性黏多糖，其主要是由硫酸软骨素A、C及各种硫酸软骨素混合形成的物质，在软骨和结缔组织中含量尤为丰富。硫酸软骨素是一类大分子糖胺聚糖类物质，因分子中硫酸基取代位置及组装形式的不同，使得不同动物或是相同动物的不同组织所含的硫酸软骨素种类也出现不同，并且其机构和生物活性也呈现出复杂多样。硫酸软骨素已经被作为安全有效的药品和保健品广泛应用于世界各地。骨关节炎（OA）是最常见的肌骨骼类疾病，研究表明该疾病已经成为一种明显的社会负担。目前，治疗OA的药物主要有三类，其中镇痛药和非甾体类抗炎药具有严重的不良反应，而硫酸软骨素具有良好的关节保护作用，是治疗OA的候选药物。此外，硫酸软骨素具有抗氧化、消除自由基，治疗牛皮癣等功能。硫酸软骨素也可以作为营养保健品及膳食补充剂使用。
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