牛虻唾液腺免疫抑制肽ImmunoregulinHA对单核巨噬细胞分化和功能影响的初步研究(3)
1987年，Ribeiro[13]首次报道了吸血节肢动物的唾液腺内含有大量的免疫调节蛋白，开启了该领域研究的先河。已有研究结果表明，吸血节肢动物的唾液腺分泌物中含有大量抗炎和免疫调控的因子 [14]。Yan等[15]从拟黑腹牛虻(Hybomitra atriperoides)的唾液腺提取物中分离纯化出具有免疫调节活性的多肽Immunoregulin HA，并验证了该多肽能显著抑制IFN-γ的分泌，并且显著提高由LPS诱导的小鼠脾细胞白介素10 (IL-10)的分泌。Zhao等[16]从雁虻(Tabanus pleskei)的唾液腺提取物中分离出多肽Immunoregulin TP1，并也验证了Immunoregulin TP1具有调节免疫相关细胞因子分泌的功能。先前已有学者对牛虻唾液腺进行过蛋白质组学方面的研究，结果发现含有大量生物活性物质[17]，并且从牛虻的唾液腺提取物中分离纯化，已经有相关研究得到了一些具有免疫调节作用的肽，并对其功能做了相应的研究。
Xu等[18]从姚虻的唾液腺中分离得到了免疫抑制肽，也用实验验证了它们可抑制炎症反应。Bai等[19]从刺舌蝇（Glossina morsitans）的唾液腺提取物中发现了一种名为Gloss 2的免疫抑制肽，该研究不仅验证了Gloss 2同样具有调节免疫相关细胞因子分泌的功能，还发现Gloss 2可能是通过Erk（extracellular signal-regulated kinase）、P38（p38 mitogen activated protein kinases）、JNK（Jun N-terminal kinase）等蛋白的磷酸化来调节免疫因子的分泌[20]。目前已经从蜱的唾液腺中鉴定出超过10种具有免疫调节功能的免疫调节肽。其中研究比较透彻的是来源于肩突硬蜱唾液腺的免疫抑制肽Salp15 [21-24]，Salp15与T细胞表面的CD4（Cluster of Differentiation 4）受体结合后，阻止了Src激酶，Lck（Tyrosine Kinase）和下游底物Zap-70的活化。Hannier等[25]报导从篦子硬蜱（Ixodes ricinus）中分离纯化的B细胞抑制蛋白BIP（Binding protein），其能显著的抑制宿主B细胞TNF-α和IL-10的合成，以及LPS刺激后CD69的表达和增殖。Yu等[26]从中华硬蜱（Hyalomma asiaticum)中分离得到的B细胞抑制因子BIF，可以抑制脂多糖诱导的B细胞分化和增殖。此外，Wu J等[27]从亚洲璃眼蜱（Hyalomma asiaticum）的唾液腺中分离了免疫抑制肽hyalomin A和B，同一基因进行编码。与此同时，也有报道称吸血节肢动物的唾液腺分泌物在一些疾病感染中起重要作用[28]。
免疫抑制肽Immunoregulin HA最早由Yan等[15]从拟黑腹牛虻(Hybomitra atriperoides）的唾液腺提取物中分离纯化。Yan等首先通过Edman降解法测定了纯化后的免疫抑制肽Immunoregulin HA的序列为GGVTGVTEFEPVDVSGEDYDSDEMDEDGRA，一共30个氨基酸残基，又从拟黑腹牛虻的cDNA文库中成功克隆了编码Immunoregulin HA前体的序列（图1）。
图1 拟黑腹牛虻Immunoregulin HA核酸序列
Fig1. Nucleotide sequence of Immunoregulin HA of the horsefly, Hybomitra atriperoides
从该序列可以看出，拟黑腹牛虻的免疫抑制肽Immunoregulin HA是由30个氨基酸残基组成的成熟肽，而其前体由68个氨基酸残基组成，在精氨酸-赖氨酸（Arg–Lys）位点经酶切后释放出成熟肽。前期研究表明，在LPS刺激大鼠脾细胞模拟炎症反应的模型中，该多肽能显著抑制γ-干扰素（IFN-γ）的分泌并显著提高由LPS诱导的小鼠脾细胞白细胞介素10（IL-10）的分泌