双酚A对豆科作物幼苗地上器官生长的影响(2)
大豆是我国四大粮食作物之一，自建国开始，中国一直是世界上最大的大豆生产国和出口国，现在随着国内经济的快速发展和大众膳食结构的逐步蛋白化，我国民众对大豆的需求量显著增加。因此，本实验选取大豆为材料，研究不同浓度的BPA对大豆种子萌发及对幼苗生长的株高、光合速率、叶面积及叶绿素影响，研究BPA对农作物的环境毒理学性质，为评价双酚A的环境污染提供理论依据。
1.试验器材
1.1试验材料
本试验选用中黄43、中黄57、庆丰一号大豆种子作为实验材料。
1.2主要试剂与仪器
1.2.1药品
双酚A、霍格兰氏营养液、营养土、乙醇（95%）、乙醇（75%）
1.2.2仪器
鼓风干燥箱、电子天平（感量0.001g）、电子称、剪刀、纱布、纸盒（底径10cm）滤纸、直尺、烧杯、玻璃棒、移液管、研钵、培养皿、漏斗、滤纸、容量瓶、光照恒温箱、可见分光光度计、pH试纸（范围为1至14）。
2．试验方法
2.1试剂配制
1、配制75%的乙醇溶液，用以对试验中所用大豆种子的消毒处理。
2、配制霍格兰氏营养液，通常浓缩10-20倍，用时稀释即可，其配方如下：
表1 霍格兰氏营养液
营养液所需药品 浓度 微量元素液 浓度 铁盐溶液 用量
四水硝酸钙 945mg/L 碘化钾 0.83mg/L Feso47H2O 2.78g
硝酸钾 506mg/L 硼酸 6.2mg/L EDYA-Na 3.73g
硝酸铵
磷酸二氢钾 80mg/L
136mg/L 硫酸锰
硫酸锌 22.3mg/L
8.6mg/L 蒸馏水
500mL
pH=5.5
硫酸镁 493mg/L 钼酸钠 0.25mg/L
铁盐溶液 2.5ml/L 硫酸铜 0.025mg/L
微量元素液 5ml/L 氯化钴 0.025mg/L
pH=6.0
3、将配制好的营养液用双酚A处理，分别配制成含有浓度为0、10、20、50、75mg/L双酚A的营养液，现用现配。
2.2 种子的预处理
挑选均匀饱满的大豆种子，将种子浸种至吸水饱满，再置吸水纸上置于室内晾干，最后用75%的乙醇浸泡8s左右进行种子消毒处理，然后用蒸馏水冲洗3遍。采用常规的纸床发芽法[4]对大豆种子进行催芽处理，处理时使用托盘，托盘内铺两层与托盘底大小相等的滤纸，然后将清洗干净的三种大豆种子分别置于其上，每个托盘200粒种子。将培养皿放入光照培养箱，温度设为为25℃，黑暗条件下培养，每天照看两次，并用蒸馏水喷洒浇灌。
2.3 幼苗的培养
幼苗的培养采取两种方法：一为水培大豆幼苗[4]，二为土培大豆幼苗[5]。置于温室中，每天黑暗11小时光照13小时，温度为25℃。
2.3.1水培大豆幼苗
每个品种的大豆准备15个一次性纸盒（底径10cm），每个盒内铺上两层滤纸，选取预处理下发芽良好一致的种子15颗，放于铺有两层滤纸的纸盒内，以每三个纸盒为一组，每一个组中的三个重复添加相同体积含有相同双酚A浓度的霍格兰氏营养液，五个组分别对应添加含有0、10、20、50、75mg/L双酚A的霍格兰氏营养液，纸盒中营养液高度为刚没过发芽的大豆种子为宜，每天早晚照看两次，浇一次，每次约为30 mL[6]，以使发芽的大豆种子迅速长成幼苗。从开始试验的第15天取样，每个处理随机取样，测定其指标。