絮凝剂产生菌的筛选及其发酵条件优化(5)
盐酸 AR 无锡市佳妮化工有限公司
氢氧化钠 AR 国药集团化学试剂有限公司
琼脂粉 BR 国药集团化学试剂有限公司
2.2.2 仪器设备
具体仪器设备见表2.2。
表2.2 实验仪器设备一览表
实验仪器 型号 厂商
数显水浴恒温振荡器 SHA-B 金坛市杰瑞尔电器有限公司
低速离心机 80-1 常州国华电器有限公司
吹冰联搅拌机 78-1 常州国华电器有限公司
电子天平 AL104 梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司
pH计 PHS-25 上海精科
高压蒸汽灭菌器 TW-AC50 上海沃迪科技有限公司
2.3 实验方法及步骤
本实验采用单因素变量法，通过单因素实验，分别研究不同碳源、氮源、培养基初始pH值、摇床转速、种子液接种量和无机盐投加量对絮凝剂形成的影响。
2.3.1 种子培养液制备
在250ml锥形瓶中装入50ml种子培养液，将2ml菌种接种到种子培养基中，于30℃、120r/min摇床转速下培养18h，进行一次摇瓶。其发酵液作为种子培养液。
2.3.2 絮凝率的测定方法
称量0.64g高岭土加入1600ml的烧杯中，加入1600ml去离子水配制成高岭土溶液，静置半天后使用。
使用方法：用量筒称量90ml高岭土溶液倒入100ml的烧杯中，再加入5ml离心后的菌液。使用吹冰联搅拌机快搅30s，慢搅10min后静置15min。然后取上清液在550nm下测量吸光度值B。同时测高岭土溶液在550nm处的吸光度值A，通过絮凝率来表征絮凝活性。公式如下所示：
絮凝率=（A﹣B）/A×100％
式中：A为高岭土溶液在550nm处的吸光度，B为样品上清液在550nm处的吸光度。
2.3.3 絮凝率产生菌的筛选
分别培养吹冰种菌种，在七个烧杯中加入90ml高岭土溶液，吹冰种菌液分别取5ml加入烧杯中，剩下一个作为空白对照。测量絮凝率，从而筛选菌种。
2.3.4 不同碳源对絮凝剂形成的影响实验
将种子培养基中的碳源-牛肉膏换成等量的葡萄糖、蔗糖，在3个250mL锥形瓶中，分别配制葡萄糖、蔗糖、牛肉膏的种子培养液50mL，再分别加入2mL菌种发酵培养液，于30℃、120r/min恒温振荡器中培养24h后，进行絮凝实验，测得絮凝率。培养48h后再测量一次，综合数据得到最佳碳源。
2.3.5 不同氮源对絮凝剂形成的影响实验
将种子培养基中的氮源-蛋白胨换成等量的硝酸钾、硫酸铵，在3个250mL锥形瓶中，分别配制硝酸钾、硫酸铵、蛋白胨的种子培养液50mL，再分别加入2mL菌种发酵培养液，于30℃、120r/min恒温振荡器中培养24h后，进行絮凝实验，测得絮凝率。培养48h后再测量一次，综合数据得到最佳氮源。
2.3.6 培养基初始pH值对絮凝剂形成的影响实验
用0.1mol/L的NaOH和0.1mol/L的HCl将培养基初始pH设置为5、6、7、8和9，分别装在5个260ml的锥形瓶里。其中培养基的装液量为50ml。然后将2ml菌种发酵培养液分别接种到上述培养基中，于30℃、120r/min恒温振荡器中培养24h后，进行絮凝实验，测得絮凝率。培养48h后再测量一次，综合数据从而确定最佳的pH值。
2.3.7 摇床转速对絮凝剂形成的影响实验
将50ml种子培养基装入到250ml锥形瓶中，将2ml菌种发酵培养液接种到培养基中，在30℃、分别以80r/min、120r/min、150r/min恒温振荡器中培养24h。然后进行絮凝实验，比较不同转速下的絮凝率，从而确定培养基最佳摇床转速的外部培养条件。
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