(1)  YPD培养基（500ml）：酵母粉5g，蛋白胨10g，琼脂粉10g，蔗糖10g，ddH2O

(2)  LB培养基(1L)：胰蛋白胨(Tryptone) 10g、酵母提取物(Yeast extract) 5g、氯化钠(NaCl) 10g、pH7.0左右，121℃灭菌20min。

(3)  50*TAE: Tris242g; Na2EDTA-2H20 37.2g;冰醋酸 57.1 mL，加去离子水充分溶解定容至IL。

(4)  TE buffer：1M Tris-HCl Buffer PH=8.0 5ml、0.5M EDTA PH=8.0 1ml定容到500ml 121℃灭菌20min。

(5)  TSB：10%PEG3350、5%DMSO、10%甘油、10mM MgSO4、用LB pH6.1定容，121℃灭菌20min。

(6)  5*KCM：0.5M KCL、0.15M CaCl2过滤除菌。

(7)  BMGH培养基：2.0％甘油，8.5g/L硫酸铵，1.79g/L YNB(酵母基础氮源培养基)，4.0*10-4％生物素，用100.0mM  pH 7.0 磷酸缓冲液，121℃，20min灭菌。其中YNB和生物素需要过滤除菌。

(8)  BMMH(Buffered Minimal Methanol)培养基：1.5％甲醇，8.5g/L硫酸铵，1.79g/L YNB，4.0*10-4％生物素，用100.0mM pH7.0磷酸缓冲液配置，缓冲液需121℃，20min灭菌，其余需过滤除菌。 源.自/吹冰·论\文'网·www.chuibin.com/

2.2  方法

2.2.1  表达载体pPICZαB-CBH2的构建

2.2.1.1   pPICZαB质粒的获得

用100mlLB液体培养基活化含有pPICZαB质粒的菌株，该菌株为上届师兄所保存的菌株，利用质粒小提试剂盒提取质粒，-20℃保存备用。

2.2.1.2  目的基因CBH2的获得

挑取购自于青兰生物公司含有目的基因CBH2的平板上的菌落接入到100ml的LB液体培养基中37℃ 150转隔夜培养。利用质粒小提试剂盒提取含有目的基因的质粒，-20℃保存备用。