2  实验方法

2.1  实验材料

普通油菜品种“中双10号”的叶片。

2.2  主要试剂

EDTANa2（乙二胺四乙酸二钠）（Biosharp）、SDS（十二烷基磺酸钠）（Biosharp）、CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）（Biosharp）、氯仿：异戊醇（24:1）（AMERSCO）、异丙醇（AR，国药集团化学试剂有限公司）、乙酸钾（AR，国药集团化学试剂有限公司）、无水乙醇（AR，国药集团化学试剂有限公司）、氯化钠（AR，国药集团化学试剂有限公司）、β-巯基乙醇、蛋白酶K等。

2.3  实验仪器

Eppendorf各量程移液枪、上海精宏DK-S28水浴锅、Eppendorf5418台式离心机、Eppendorf5810R台式高速冷冻离心机、Eppendorf Biophotometer核酸蛋白测定仪、梅特勒FE20pH计、上海沪西85-1磁力搅拌器、BIO-RAD Gel Dox XR System凝胶成像系统。文献综述

2.4  提取液的配置

2XCTAB缓冲液：100mmol/L Tris-HCl(pH8.0)

4mol/L NaCl

20mmol/L EDTA(pH8.0)

2ml/100mlCTAB

0.2ml/100ml β-巯基乙醇

SDS提取缓冲液：100mmol/L Tris-HCl(pH8.0)

500mmol/L NaCl

50mmol/L EDTA(pH8.0)

10mol/L β-巯基乙醇

1.5ml/100ml SDS

DNA提取缓冲液：10mmol/L Tris-HCl(pH8. 0)

0.4mol/L NaCl

2mmol/L EDTA(pH8.0)

2.5  提取方法

2.5.1  CTAB法

CTAB是一种阳离子去污剂，能与核酸形成复合物，此复合物在高盐（>0.7mol/L）浓度下可溶，并稳定存在，但在低盐浓度（0.1～0.5mol/LNaCl）下CTAB-核酸复合物就因溶解度降低而沉淀，而大部分的蛋白质及多糖等仍溶解于溶液中。通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。经离心弃上清后，CTAB-核酸复合物再用70%酒精浸泡可洗脱掉CTAB。

（1）称取100mg新鲜的油菜叶片加液氮研磨成粉末状。

（2）加入CTAB提取缓冲液500ml水浴30min。

（3）用2×CTAB提取缓冲液提取。来.自/吹冰论|文-网www.chuibin.com/

（4）加入等体积氯仿/异戊醇抽提两次。

（5）上相加入2/3倍体积的预冷异丙醇，温和混匀，室温下放置15min以上。

（6）12000r/min离心10min，沉淀用75%乙醇洗一次。

（7）吹干后加ddH2O溶解DNA。