用PEG-6000来模拟水分胁迫条件,配置一系列水势梯度的溶液(0、-0.1、-0.2、-0.4、-0.6、-0.8MPa)[7]。分别对俩种水稻进行胁迫处理。并精选出俩种水稻的颗粒饱满的种子,在垫有俩层滤纸的培养皿中各加50粒,然后加入10mL配置好的具有不同水势的PEG溶液。置于20℃培养箱培养7天。

培养七天之后,将萌发的培根和胚芽去除,并将种子去壳之后,低温保存备用。

2.3 实验方法来.自/吹冰论|文-网www.chuibin.com/

2.3.1 CAT活性的测定

采用紫外速率直接法[8]

(1)试剂配制:0.15mol/L磷酸缓冲液(PBS pH7.0)

A母液:0.2mol/L磷酸氢二钠溶液:取分子量为358.14的Na2HPO4.12H2O  71.7g

B母液:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液:取分子量为156.01的NaH2PO4.2H2O  31.2g

0.15mol/L PBS pH7.0配制:取A母液228.75mL和B母液149.25mL混合后用蒸馏水定容至500mL。

(2)反应液配制:取200mLPBS 0.15M,pH7.0,加入0.3092mL30%的H2O2原液摇匀即可。

(3)样品测定:取3mL反应液加入0.1mL,酶液,以PBS为对照调零,测定OD240,测定30s。

(4)酶活的计算:以每分钟OD减少0.01为一个酶活单位(μ)。

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