最佳时间的测定：吸取0.1mL 1mg/mL羧苄西林钠溶液于试管中，再加入0.9mL的蒸馏水，然后加入5mL试剂A，室温（15℃）静置10min后，加入0.5mL试剂B（福林酚显色剂）后立即混匀，室温（15℃）静置30min显色后，将试剂空白作参比，在分光光度计下进行760nm的测定。文献综述

试剂A用量的测定[10]：吸取0.1mL 1mg/mL羧苄西林钠溶液于试管中，分别加入1mL、3mL、5mL、6mL、7mL、8mL、9mL试剂A，室温（15℃）静置10min后，加入0.5mL试剂B（福林酚显色剂）立即摇匀后，室温（15℃）静置30min（其中羧苄西林钠的用量：试剂A的用量：试剂B的用量为1:10:5、1:30:5、1:50:5、1:60:5、1:70:5、1:80:5、1:90:5，总体积为10mL，不足的用蒸馏水补足），将试剂空白作参比，在分光光度计下进行760nm的测定。

2.2.3 试剂B最佳温度和时间、用量的确定。

最佳温度和时间的测定[10]：吸取0.1mL 1mg/mL羧苄西林钠溶液于试管中，再加入0.9mL的蒸馏水，然后加入5mL试剂A，室温（15℃）静置10min后，加入0.5mL试剂B（福林酚显色剂）后立即混匀后，分别在不同温度（30℃、40℃、50℃、60℃、70℃）水浴锅中水浴不同时间（10min、20min、30min、40min、50min、60min）显色后取出，将试剂空白作参比，在分光光度计下进行760nm的测定。

试剂B用量的测定：吸取0.1mL 1mg/mL羧苄西林钠溶液于试管中，再加入0.9mL的蒸馏水，然后加入5mL试剂A，室温（15℃）静置10min后，分别加入0.1mL、0.3mL、0.5mL、0.7mL、0.9mL试剂B（福林酚显色剂）立即摇匀后，在30℃水浴锅中水浴30min，将试剂空白作参比，在分光光度计下进行760nm的测定。

2. 3 方法评价[8,12~13]

2.3.1 稳定性试验

取0.1m l 1mg/mL羧苄西林钠溶液于试管中，再加入0.9mL的蒸馏水，然后加入5mL试剂A，室温（15℃）静置10min后，加入0.5mL试剂B（福林酚显色剂）立即摇匀后，在30℃水浴锅中水浴30min，将试剂空白作参比，分别在放置0min、30min、60min、90min、120min后，在分光光度计760nm下测吸光度，以评价该比色法在一定时间内的稳定性。

2.3.2 重现性试验来!自~吹冰论-文|网www.chuibin.com

分别配制5个1mg/mL羧苄西林钠溶液，依照上述的方法分别测出其OD值，然后算出其羧苄西林钠的含量值，并计算测定结果的相对偏差（RSD），以评价该方法的重现性。

2.3.3 精密度试验

用福林酚比色法对同一个1mg/mL羧苄西林钠溶液，依照上述方法，5次测定其OD值，然后算出其羧苄西林钠的含量值，并计算测定结果的相对偏差（RSD）来评价该方法的精密度。

3 结果与分析

3.1 最佳测定波长的确定

将羧苄西林钠与福林酚试剂反应后，用分光光度计，在400~800nm范围内扫描出来的结果见图1。如图1所示，羧苄西林钠溶液经过显色反应后，最大吸收峰在760nm处，因此以760nm作为最大吸收波长。