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3  方法来`自^吹冰论*文-网www.chuibin.com

3.1 主要试剂及培养基的配置

    BMGH：1 % 甘油、7.5 g/L YNB、4×10-5  % 生物素、0.1M磷酸钾缓冲液(pH8.0)，121℃灭菌20 min，其中YNB和生物素需要过滤除菌。

BMMH：1 %甲醇、7.5 g/LYNB、4×10-5 %生物素、0.1 M磷酸钾缓冲液(pH8.0)，121℃灭菌20 min，其中YNB和生物素需要过滤除菌。

DNS：蒸馏水1416mL、氢氧化钠19.8g、3,5-二硝基水杨酸10.6g混合，溶解后加入酒石酸钾钠306g、苯酚（50℃溶化）7.6mL、偏重亚硫酸钠8.3g，用5-6mL，0.1M的HCl对3mL配好的溶液进行滴定，用苯酚作指示剂，溶液从红色变成原有的颜色。如果有必要时还需要加入氢氧化钠，配好的DNS分装后需避光。

柠檬酸缓冲液：柠檬酸210g、蒸馏水750mL、氢氧化钠（加到pH3.0）40-60g。将柠檬酸原缓冲液与蒸馏水按1：19的比例进行稀释，之后用氢氧化钠溶液调节pH至4.0。

样品溶解液(100mL)：终浓度为50mM/L Tris-HCl(pH6.8)2mL、2%SDS 2g、0.1%溴酚蓝0.1g、10%甘油10mL,补ddH2O到100mL。