摘  要：本文是关于重组马克斯克鲁维酵母产外切葡聚糖酶的纯化与酶学性质分析的研究。使用聚乙二醇法、Ni亲和层析等分离技术，从重组马克斯克鲁维酵母中分离纯化出一种外切葡聚糖酶（CBH2）,经电泳鉴定均为单一组分。70583

对纯化得到的外切葡聚糖酶的基本酶学性质进行了研究。SDS-PADE电泳测得一种纤维素酶组分CBH2的分子量为53 kD。该纤维素酶最适温度为45 ℃；最适反应pH为5.0。Fe3+、Ag+、Al3+对酶有强烈的抑制作用，Fe2+、Ca2+、Co2+、Mn2+对酶有一定的激活作用，其他金属离子影响不大。

毕业论文关 键 词：马克斯克鲁维酵母；外切葡聚糖酶；纯化；酶学分析

Abstract：This job was about the Purification and Enzymatic Properties of exoglucanase genes(CBHⅡ) from Kluyveromyces marxianus. Crude exoglucanase genes(CBHⅡ) from Kluyveromyces marxianus was purified through condensation of polyethylene glycol ,Ni Sepharose 6 Fast Flow, and so on. The cellulose displayed one single band on SDS-PAGE respectively.

Basic enzymatic characteristic of obtained cellulose were studied. The molecular weight of exoglucanase genes(CBHⅡ) was 53 kD. The optimal reaction pH and temperature of CBHⅡwere 5.0 and 45 ℃. The enzyme activity was inhibited by metal ions such as Fe3+、Ag+、Al3+, but enhanced by Fe2+、Ca2+、Co2+ and Mn2+,and others had no significant effect.

Keywords: Kluyveromyces marxianus；exoglucanase genes；purification；enzymatic property

目  录

1  前言 6

1.1 研究背景 6

1.2 立题依据 6

2  材料与方法 7

2.1  菌株 7

2.2  培养基与试剂 7

2.2.1  培养基 7

2.2.2  试剂 7

2.3  外切葡聚糖酶组分的分离纯化 8

2.3.1  外切葡聚糖酶发酵液浓缩 8

2.3.2  聚乙二醇法浓缩 8

2.3.3  Ni亲和层析 8

2.4  DNS法测定酶活力 9

2.4.1  测定原理4 9

2.4.2   纤维素酶活力测定 9

2.5 外切葡聚糖酶组分分析方法 10

2.5.1  总蛋白含量测定 10

2.5.2  不连续SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）7 10

2.6  外切葡聚糖酶组分酶学分析 11

2.6.1  纯化外切葡聚糖酶最适反应温度 11

2.6.2  纯化外切葡聚糖酶最适pH 11

2.6.3金属离子对纤维素酶的影响 11

3  结果与讨论 12

3.1  重组外切葡聚糖酶纯化过程参数和不连续SDS-PAGE凝胶电泳 12

3.2  纯化外切葡聚糖酶最适反应温度 13

3.3  纯化外切葡聚糖酶最适pH 13

3.4金属离子对外切葡聚糖酶酶活的影响