2.3.3引物的设计与合成

本实验所用的引物是参照GenBank上已发表的绵羊TGFBR2基因序列（Accession No.：NC_022314.1），由上海生工借助 Primer premier 5.0软件设计并合成的。P1、P2、P3、P4引物分别扩增的是外显子2、外显子3、外显子4和外显子5。 

根据上述基因序列，我们共设计了4对引物（P1、P2、P3、P4），引物序列、所扩增片段的大小和退火温度等见表2-2。

表2-2 TGFBR2基因PCR扩增引物序列

Table 2-2 Primer sequences for PCR amplification of TGFBR2 gene

引物

Primers 引物序列（5’→3’）

Sequence of primers 扩增片段大小

Product size 退火温度

Temperature

P4 F: 5 '- TCATCTGGCATCGCATCGTA - 3'

R: 5' - GGACAGATGCCAAAGAGACGA -3'

F: 5' - GAGCTGTGAGTGACGGGAG - 3'

R: 5'- CCGACCCTGTCACCCCTTA - 3'

F: 5' - TGTGCTGATGGGG来*自-优=尔,论:文+网www.chuibin.com CACA - 3'

R: 5'- TGGATGAGGTCAGAGTGCAGG - 3'

F: 5'- GGCCTCTGTGTGTGTTCTTCT - 3'

R: 5'- CTGTATCCCTGAACTCGTGC - 3' 350 bp

2.3.4 PCR扩增及检测

2.3.4.1 PCR反应体系

本实验选用了汇集有Taq DNA聚合酶、dNTPs、镁离子和缓冲溶液的PCR混合液，和传统加样方法相比，此操作过程更快速简便，取样的误差降低了。此外由于混合液中加入了PCR所用的增强剂、优化剂等，使PCR反应特异性增强，灵敏度显著提高，扩增结果也更精准。