1。2。2诱导分化

传代3次后，观察细胞数量足够，用条件来*自-优=尔,论:文+网www.chuibin.com 培养液 ( 含地塞米松10^-5mmol/L、甘油磷酸钠 10mmol/L、维生素 C 50mg/L 的 DMEM 培养基)培养，每 2d 换一次培养液，诱导MC3T3E1细胞向成骨细胞分化，约 6d后用作共培养实验。

地塞米松10^-5mmol/L（20度冰箱）0。04mg。

甘油磷酸钠 10mmol/L（室温）0。216g。(1。08g/5ml)

维生素C 50mg/L（室温）：10ml

以上都要过滤。

1。2。3 Bio-oss与MC3T3E1共培养

诱导分化后的MC3T3E1细胞与 Bio-oss 骨粉共培养：用 DMEM 培养基浸透 Bio-oss 骨粉后吸出多余液体，每孔约 0。01g 颗粒状固体,按 5x105/孔将诱导分化后的MC3T3E1细胞悬液滴入6孔板,标准条件培养。共培养 6d 后细胞连接成片,填充于骨粉周边,并分泌细胞外基质,骨粉边缘部分还可见细胞重叠成团。

1。2。4 ALP染色

alcoline磷酸酶在体外对成骨细胞的染色

1。丢弃中间物，在RT上用10%的福尔马林定位30分钟。

2。用PBS三次洗涤。

3。用配方将成骨细胞进行染色20到30分钟，RT、alcoline磷酸酶配方在下面表一列出：