（6） 用PBST冲洗切片三次，每次10分钟

（7） 用5%驴血清封闭切片，2小时

（8） 用一抗孵育脑片，4℃，17小时

（9） 用PBST冲洗切片五次，每次10分钟

（10） 用二抗孵育切片，2小时

（11） 用PBST冲洗切片三次，每次10分钟

（12） 用漂片法将脑片贴与显微镜玻片上（Fisherbrand），并用70%甘油封片

（13） 用扫描电子显微镜（Olympus VS120）进行拍片

1。 3。5 原位杂交

实验目的：用标记的单链核苷酸探针与切片中目的组织反应，从而对特定核苷酸序列进行定位，用以验证背侧中缝核处5-羟色胺神经元NMDA受体的NR1亚基是否被敲除。

实验步骤：来*自-优=尔,论:文+网www.chuibin.com

A． 探针准备

a。 限制性内切酶酶解作用

b。 PCR DNA 线性化作用

B。 切片预处理

（1）将切片放在烘片机（60℃）上，烘干1小时，然后放入干净的匣子中。（匣子需要在37℃中用DepC-ddH2O处理过夜）

（2）在4%多聚甲醛中固定20分钟。

（3）用DepC-PBS在室温下清洗2次，每次5分钟。

（4）切片用10µg/ml蛋白酶K（在PK缓冲液中）处理8-15分钟。

（5）用DepC-PBS清洗一次，5分钟。再放入4%多聚甲醛（在DepC-PBS中）中固定20分钟。

（6）在DepC-ddH2O中漂洗一次。

（7）倒尽DepC-ddH2O，并加入三乙醇胺乙酸酐，现配现用，室温下处理8分钟。

（8）在DepC-PBS中清洗切片5分钟