2。2 土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）

2。2。1 试剂：

1）甲苯2）10%尿素3）柠檬酸盐缓冲液（pH6。7）4）苯酚钠溶液（1。35mol/L）5）次氯酸钠溶液6）氮的标准溶液。

2。2。2  操作步骤：

称取5g土样于50mL三角瓶中，加1mL甲苯，振荡均匀，15min后加10mL10%尿素溶液和20mL PH 6。7柠檬酸盐缓冲溶液，摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。培养结束后过滤，过滤后取1mL滤液加入50mL容量瓶中，再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计与578nm波长处比色。（靛酚的蓝色在1h内保持稳定）。

标准曲线制作：在测定样品吸光值之前，分别取0、1、3、5、7、9、11、13mL氮工作液，移于50mL容量瓶中，然后补加蒸馏水至20mL。再加入4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计上于578nm波长处比色。然后以氮工作液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

2。3 土壤磷酸酶活性测定（磷酸苯二钠比色法）

2。3。1 试剂：

1）缓冲液：醋酸盐缓冲液（PH 5。0），柠檬酸盐缓冲液（PH 7。0），硼酸盐缓冲液（PH 9。6），2）0。5% 磷酸苯二钠（用缓冲液配制），3）氯代二溴对苯醌亚胺试剂，4）甲苯，5）0。3%硫酸铝溶液，6）酚标准溶液。

2。3。2 操作步骤：

称5g土样置于200mL三角瓶中，加2。5mL甲苯，轻摇15min后，加入20mL 0。5%磷酸苯二钠（酸性磷酸酶用乙酸盐缓冲液；中性磷酸酶用柠檬酸盐缓冲液；碱性磷酸酶用硼酸盐缓冲液），仔细摇匀后放入恒温箱，37℃下培养24h。然后在培养液加入100mL 0。3%硫酸铝溶液并过滤。吸取3mL滤液于50mL容量瓶中，然后按绘制标准曲线方法显色。用硼酸缓冲液时，呈现蓝色，于分光光度计上660nm处比色。来*自-优=尔,论:文+网www.chuibin.com

标准曲线绘制：取0、1、3、5、7、9、11、13mL酚工作液，置于50mL容量瓶中，每瓶加入5mL硼酸缓冲液和4滴氯代二溴对苯醌亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后，在分光光度计上660nm处比色。以显色液中酚浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

2。4 土壤蔗糖酶活性测定（3,5- 二硝基水杨酸比色法）

2。4。1 试剂：

1）酶促反应试剂2）葡萄糖标准液（1mg/mL） 3） 3,5- 二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）。