（2）加入150μl预冷（-20℃）的5M KAC，冰上放置30分钟，期间反复轻弹混匀。

（3）4℃6000rpm离心10min，取上清（600μl）转移至新的1。5ml离心管中。

（4）加入等体积（600μl）的酚：氯仿：异戊醇（25:24:1），颠倒混匀5分钟。

（5）4℃6000rpm离心10min，取上清（500μl）转移至新的1。5ml离心管中。

（6）加入等体积（500μl）的氯仿：异戊醇（24:1）来*自-优=尔,论:文+网www.chuibin.com ，颠倒混匀5分钟。

（7）4℃6000rpm离心10min，取上清（480μl）。

（8）加入2/3体积（320μl）已预冷的异丙醇，混匀，﹣20℃放置30分钟,或更长或过夜沉淀DNA。

（9）6000rpm离心10分钟，弃上清，在吸水纸上放置1min，吸干水。

（10）加入500μl75％的乙醇清洗DNA，洗涤至少20min，6000rpm离心10分钟，弃上清。

（11）重复步骤10，弃上清后置于超净台吹干。

（12）用100μl纯水溶解DNA，-20℃保存备用。

2。4。2 引物序列

根据国家发布的检测转基因小麦的引物，委托上海捷瑞生物工程有限公司合成，引物序列详见表1。

2。4。3 PCR检测 

（1）定性PCR扩增

 PCR技术是一种体外扩增技术，在引物、模板DNA和C(胞嘧啶）、G（鸟嘌呤）、A（腺嘌呤）、T（胸嘧啶）核苷酸存在的条件下，进行的聚合酶的酶促反应，通过酶促反应，使DNA片段在数量上呈指数增加的技术，使用该技术能在短时间内获得大量的特定基因片段。