磷酸缓冲液 Thermo Fisher Scientific

Na2HPO4 生工生物工程上海(股份)有限公司

胎牛血清 浙江天杭生物科技有限公司

琼脂糖 伯乐有限公司

Tween-20 Sigma-Aldrich

PV25抗体 MILIPORE

Taq mix 生工生物工程上海(股份)有限公司

BCA Medchemexpress Co。,ltd

30%Acr-Bis(29:1) 上海博谷生物科技有限公司

SDS Sigma-Aldrich文献综述

NenN抗体 MILIPORE

2。1。3实验仪器

仪器名称 公司 型号

台式高速离心机 eppendorf centrifuge5804

电热恒温水浴锅 上海森信实验仪器有限公司 DK-S24

振动式切片机 德国Leica VT1000

移液枪 eppendorf Research plus

-80OC冰箱 Thermo Fisher Scientific Forma 88000 series

电子天平 美国奥豪斯仪器(上海)有限公司 CP2102

Zeiss激光扫描共聚焦显微镜 Zeiss 光学仪器（上海 ）国际贸易有限公司 LSM710

Bio-Rad ChemiDoc MP 全能型凝胶成像分析系统 伯乐生命医学产品（上海）有限公司 ChemiDoc MP

Bio-Rad伯乐梯度PCR仪 伯乐生命医学产品（上海）有限公司 C1000

4℃层析柜 Thermo Fisher Scientific REC54004V

Bio-Rad伯乐 1645050 基础电源 伯乐生命医学产品（上海）有限公司 1645050

Bio-Rad伯乐 1658001 小型垂直电泳槽 伯乐生命医学产品（上海）有限公司 1658001

2。1。4实验耗材

枪头 江苏康健医疗用品有限公司

消毒酒精 杭州欧拓普生物技术有限公司

离心管 Thermo Fisher Scientific

六孔板 Thermo Fisher Scientific

饲料 江苏协同医药生物工程有限责任公司

2。2实验方法

2。2。1转基因小鼠基因型鉴定

Genotyping 分为提取DNA，PCR，电泳以及电泳结果拍照。

（1）提取DNA

1）收集1-2mm尾巴，加入100ul Tail Buffer II(内含0。2mg/ml PK)（99ul Tail Buffer 1ul PK）

2)55度水浴过夜来*自~优|尔^论:文+网www.chuibin.com +QQ752018766*

3）漩涡振荡，12000rpm，10min离心（准备一批新管）

4）取50 ul上清到新管，加50 ul异丙醇，混匀（可用漩涡振荡，速度要慢）

5）再次12000rpm，10min离心，弃上清（吸干上清）

6）用70%乙醇200ul洗管（加时要轻柔）倒掉上清，吸干剩余液体，室温干燥15min