摘要：为了获得比活高，产量大，稳定性好的菊粉酶，本实验选取了马克斯克鲁维酵母作表达系统，对重组马克斯克鲁维酵母产菊粉酶的发酵条件进行了优化。采用液体摇瓶培养的方法将接种量、碳源、碳源浓度、氮源、氮源浓度、pH、培养温度和培养时间等因素对菊粉酶产量的影响进行了研究。实验得出最优的发酵培养基为：接种量6%，乳糖6%，酵母粉1%，初始pH5。5，250 mL锥形瓶装液量50mL。采用最优培养基于28℃，150 r/min分批培养，发酵72小时后菊粉酶活力达到最高，为70563。9 U/mL。本次实验明显提高了菊粉酶的产量。76761

毕业论文关键词：马克斯克鲁维酵母，菊粉酶，发酵，摇瓶培养

Abstract: In order to obtain the inulinase with high specific activity, large production and good stability ,we selected the Kluyveromyces marxianus as expression system, optimizing the fermentation conditions of recombinant Kluyveromyces marxianus inulinase production。 Liquid shake culture was used and inoculation quantity, carbon source, carbon source concentration, nitrogen source, nitrogen source concentration, pH, culture temperature and culture time were taken as factors to study the influence of inulinase production。The most appropriate the optimal fermentation medium was composed of inoculation quantity 6%, lactose 6%, yeast powder 1%, initial pH5。5, 50 mL loading volume in 250 mL erlenmeyer flask。Using the optimal cultivation based on 28 ℃, and 150 r/min batch cultivation, inulinase activity of  70563。9 U/mL reached the highest after 72 hours。After this study ,the inulinase production was improved remarkablely。

Keywords：Kluyveromyces marxianus; Inulinase; Fermentation; Shake flask culture

目 录

1  前言 6

1。1  菊粉酶的概述 6

1。2  菊粉酶的分类 6

1。3  分泌菊粉酶的微生物 6

2  材料与方法 7

2。1  菌株 7

2。2  培养基和试剂 7

2。2。1  培养基 7

2。2。2试剂 7

2。3方法 7

2。3。1果糖标准曲线的制定 7

2。3。2扩大培养菌种 8

2。3。3接种 8

2。3。4菊粉酶活力测定 8

2。3。5酶活的计算 8

2。3。6发酵条件的优化 8

2。3。6。1接种量优化 8

2。3。6。2碳源优化 9

2。3。6。3碳源浓度优化 9

2。3。6。4氮源优化 9

2。3。6。5氮源浓度优化 9

2。3。6。6初始pH值优化 9

2。3。6。7发酵温度优化 9

2。3。6。8发酵时间优化 9

3。结果与讨论 9

3。1果糖标准曲线 9

3。2接种量对菌种产菊粉酶的影响 10

3。3不同碳源对菌种产菊粉酶的影响