2。2。4  海藻糖含量的测定

使用HPLC法测定样品中海藻糖的含量[22,23]。流动相为乙腈：水=72：28；流速：0。6 mL/min；层析柱选择氨基柱；选用视差折光检测器。

3  结果与讨论

3。1  通透性处理大肠杆菌实验参数的优化

3。1。1  通透性试剂的最适浓度

在细胞悬液中加入硫酸粘杆菌素，使得最终浓度分别达到1。0 g/L、1。2 g/L、1。5 g/L、1。7 g/L、2。0 g/L，在25℃条件下反应60 min，测细胞悬浮液中海藻糖合成酶的活性，结果如下图3-1所示。

图3-1硫酸粘杆菌素浓度对细胞通透性的影响

由图3-1可知，硫酸粘杆菌素浓度的增加，使得大肠杆菌细胞通透性同步增加，利于底物小分子进入胞内参与酶催化反应，当浓度达到1。5 g/L时检测酶活达到最大值。但是，随着硫酸粘杆菌素浓度的进一步加大，检测酶活反而迅速降低。由于硫酸粘杆菌素能够通过自身所带正电荷与细菌胞浆膜磷脂分子上的负电荷形成静电吸附，结合并进入质膜中，通过其分子间的相互位移而聚合形成跨膜离子通道，使细胞膜原有的排列顺序发生了改变。硫酸粘杆菌素添加浓度越高，细胞膜的有序结构破坏越严重，最终致使菌体溶解，从而使得检测酶活急剧降低。

3。1。2  通透性处理的最适时间

选取1。5 g/L硫酸粘杆菌素在25℃下处理大肠杆菌细胞，反应时间分别为30 min、60 min、90 min、120 min，测定细胞悬浮液中海藻糖合成酶的活性，结果见图3-2。

图3-2 硫酸粘杆菌素处理细胞时间对细胞通透性的影响来~自,优^尔-论;文*网www.chuibin.com +QQ752018766-

由图3-2可见，随着处理时间的加大，细胞通透性程度加剧，使得检测到的酶活提高，在60 min时达到最高值，随后，随着处理时间的增加可检测到的酶活急剧下降。可能原因是，当处理时间延长时，硫酸粘杆菌素与细胞膜表面形成的离子通道激增，由于渗透压的作用使得水分子进入胞内，细胞溶胀，部分海藻糖合成酶从细胞中释放出来，从而使得检测到的酶活下降。

3。1。3  通透性处理的最适温度

选取1。5 g/L硫酸粘杆菌素处理大肠杆菌细胞60 min，处理温度分别是25℃、28℃、30℃、33℃、35℃，测定细胞悬浮液中海藻糖合成酶的活性