2。8 Caspase-3 活力检测

取对数生长期PC12细胞，每孔接种1×106个细胞于6孔板，培养16 h后，倒掉旧培养基，加入不同浓度的样品溶液，0。5 h后，加入浓度为0。5mM H2O2处理6 h，吸去上清，采用预冷的PBS冲洗细胞并将细胞刮入离心管中，4℃下10,000 r/min 离心10 min，将上清弃掉，收集的细胞按照试剂盒方法测Caspase-3 活力。

2。9 PC12细胞Bax和 Bcl-2 mRNA 表达变化检测(real time RT-PCR)来-自~优+尔=论.文,网www.chuibin.com +QQ752018766-

取对数生长期PC12细胞，接种3×106个细胞于4 mL培养基中，培养16 h后，倒掉旧培养基，设置空白组，对照组，向样品组加入不同浓度的样品溶液，放入培养箱培养30 min后，加入浓度为0。5 mM H2O2培养6 h，按照TRIzol法提取细胞总RNA进行浓度测定，OD 260 /OD 280鉴定纯度，跑RNA胶看是否降解。取2 μg RNA反转录成cDNA后PCR扩增。Bax的引物序列为上游：5’-CTGCAGAGGATGATTGCTGA-3’，下游：5’-GAGGAAGTCCAGTGTCCAGC-3’；Bcl-2引物序列为上游：5’-ATCTTCTCCTTCCAGCCTGA-3’，下游：5’-TGCAGCTGACTGGACATCTC-3’；GAPDH的引物序列为上游：5’-CACTCACGGCAAATTCAACGGCA-3’，下游：5’-GACTCCACGACATACTCAGCAC-3’。反应体系及条件：25 μl预混合Ex Taq，cDNA  4 μL，1 μl荧光染料，上、下游引物各1 μL以及9 μl蒸馏水混合后置入96孔板中。94°C预变性10 min后，94°C变性15 s，55°C复性15 s，72°C延伸30 s，扩增30个循环，72°C延伸1 min后。进行光密度积分值分析，与内参照GAPDH产物的光密度积分值之比作为相对含量值。