2。6。2 琼脂糖凝胶电泳

    （1）称取0。75g的琼脂糖粉末，放到一锥形瓶中，加入100 mL 1×TAE电泳缓冲液。然后置于微波炉加热至完全溶化，溶液均匀透明。冷却至60℃左右，在胶液内加入适量的核酸染料Goldview。

（2）取制胶板槽，水平放置胶槽，在一端插好梳子，在槽内缓慢倒入已冷至60℃左右的胶液，使之形成均匀水平的胶面，凝胶厚度约为3~5 mm。

    （3）待凝固后，小心拔起梳子，使加样孔端置阴极端放进电泳槽内。

（4）在槽内加入1×TAE电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面。

（5）取2µL待检测的PCR扩增产物样品与2µL loading buffer混匀后，用移液抢加至凝胶的加样孔中。在第一个加样孔中加入DNA Marker。

（6）连接电泳仪和电泳槽，并接通电源，设置电压为120v，电泳时间为30min左右。

（7）电泳结束后，小心取出凝胶块，放于凝胶成像仪中观察并拍照。来-自~优+尔=论.文,网www.chuibin.com +QQ752018766-

2。6。3 菌株16S r-DNA序列测定与分析

    经琼脂糖凝胶电泳检测后的PCR扩增产物送到上海生工生物工程有限公司进行测序分析，将测序结果提交到美国生物技术信息中心数据库NCBI（http://blast。ncbi。nlm。 nih。gov/）中进行核酸的Blast比对。

3  结果与分析

3。1 菌株分离与菌落形态观察

    从莴苣田土壤中分离划线培养得到的菌株。如图3-1所示，该菌在LB培养基上生长3d后，菌落呈深黄色，圆形，直径约为1mm，表面凸起，光滑，边缘整齐。