氧化应激下酵母蛋白的表达模式分析(3)
1.1.4主要仪器
电磁炉，锅，容量瓶，烧杯，锥形瓶，纱布，电子天平，分光光度计，pH计，试管，培养皿，酒精灯，玻璃棒，滴定管，移液管，移液枪，接种环，接种针，离心机，恒温箱，恒温震荡培养箱，超声波破碎仪，灭菌锅，超净工作台，电泳仪等。
1.2 试验方法
1.2.1 酵母活化
(1) 取10支试管分别装入9 mL蒸馏水，加棉塞用报纸包好，放入灭菌锅中随培养基和培养皿灭菌，条件0.105 MPa，121 ℃，20 min。然后放入超净工作台中自然冷却至50～60 ℃。
(2) 称取1 g安琪甜酒曲放入1号试管，震荡，用移液枪吸取1 mL加入2号试管中，依次到10号试管。将冷却好的YPD培养基均匀倒入10个培养皿中，编号1～10，直至冷却凝固。用移液枪吸取试管中的液体10 μL于相对应的培养皿中涂布均匀，放入恒温培养箱中，30 ℃下培养24 h[10]。
1.2.2 酵母菌的初筛
(1) 利用YPD液体培养基进行梯度稀释初选：取10支试管加入9 mL蒸馏水，加棉塞，报纸包装随培养皿和装有YPD培养基的锥形瓶一起灭菌，条件为0.105 MPa，121 ℃，20 min。将灭菌好的材料，仪器拿到超净工作台中操作。
(2) 取长势较好的菌落，用接种环接取一环放入1号试管，震荡，然后用移液枪吸取1 mL放入2号试管，依此到10号试管。再用移液枪吸10 μL于对应的培养皿中，涂布均匀，放入恒温培养箱中，30 ℃培养24 h。
1.2.3 酵母菌的复筛
(1) 培养皿5个一组用报纸包好和装有YPD固体培养基的锥形瓶一块放入灭菌锅中进行灭菌，条件0.105 MPa，121 ℃，20 min。将灭菌好的器材放入超净工作台中。
(2) 待培养基冷却至50～60 ℃时倒平板，直至培养基完全凝固。点燃酒精灯，用接种针挑取长势最好的进行划线，将划线过的培养皿放入恒温培养箱中培养，条件为30 ℃培养24 h。
1.2.4 酵母菌的鉴定
(1) 24 h过后观察划线的酵母，划线培养后酵母能够形成单一菌落，但都成圆状，乳白色，表面光滑湿润不干燥，中央有白色凸起。
(2) 取一载玻片滴入一滴美蓝溶液，再用接种针在菌落最小处挑取少许，放入滴在载玻片的美蓝中，用接种针搅拌均匀，盖上盖玻片，在显微镜下进行观察。
1.2.5酵母菌的扩大培养
(1) 配制500 ml YPD液体培养基，分装到5个100 mL锥形瓶中。
(2) 挑取镜检下菌落接种到锥形瓶中，放入摇床中进行扩大培养，条件为150 r/min，30℃，26 h。
(3) 分别在600 nm下测定培养15 h，17 h，18 h，19 h，24 h，25 h，26 h的酵母菌液的OD值