已有研究表明，黄花马蹄莲与胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种活体互作过程中，在不同时间点，均有数百个基因差异表达。其中包括编码核糖体小亚基甲基转移酶的rsmA基因。rsmA是一种RNA结合蛋白,可以与很多基因位点上的mRNA结合,阻遏转录起始位点与核糖体结合,从而实现转录后的调控[3]。

为探究Pcc的rsmA基因及其基因产物的致病功能，本研究通过构建rsmA的缺失突变体，比较rsmA缺失突变体与野生型在致病性、生物学特性、相关致病因子的差异，探究该种基因及基因产物对致病性的影响，为细菌性软腐病的防治提供一定的科学依据。文献综述

1  材料与方法 

1。1  材料

1。1。1  供试菌株和质粒  本研究所用质粒和供试菌株见表1。胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜亚种野生型菌株PccSl于LB培养基中28 °C培养，大肠杆菌(Escherichia coli)于LB培养基中37 °C培养[4]。菌株Pcc的培养：液体培养和固体培养均在28℃进行，液体培养时置于摇床中，200 rpm培养12-24 h[5]。

表1  本研究所用菌株和质粒

Table 1  Strains and plasmids used in this study

质粒/菌株     

Strains /plasmids 相关特性Relevant characteristics 来源Source

Escherichia coli

DH5α Φ80 lacZΔM15, (lacZYA-argF)U169。recA1,endA1。thi-1 Lab collection

S17-1λpir λpir pro hsdR, recA Lab collection

Pectobacterium carotovorum subsp。 carotovorum

PccS1 Wild type RifR Lab collection

PccS1-R RifR ，induced from PccS1 with resistance to Rif This study

ΔrsmA Rif R，Kan R，the rsmA gene knock-out mutant of strain PccS1 This study

Plasmid

pEX18Gm Allelic exchange suicide vector, sacB oriT(RP4) LacZ,GmR Lab collection

pET30a expression vector,Kan R Lab collection

1。1。2  试剂和仪器 

本研究所用引物由金唯智公司完成；r-Taq聚合酶、T4DNALigaseDNA marker、限制性内切酶、T4 DNA连接酶均为Thermo Fisher Scientific公司提供；反转录试剂盒PrimeScriptTMRT Reagent ( Perfect Real Time ) Kit为TaKaRa公司提供；细菌基因组DNA提取试剂盒、琼脂糖凝胶回收试剂盒和质粒提取试剂盒均由Axygen公司提供；细菌RNA提取试剂盒由Bioteke公司提供；冷冻离心机、PCR仪和分光光度计均为Eppendorf公司提供；琼脂凝胶成像系统由Bio-Rad公司提供，紫外分光光度计由 Thermo Nanodrop公司提供。

1。1。3  培养基、抗生素及抗生素浓度   

（1）LB（Luria Bertani）固体和液体培养基

将10。0 g Tryptone、 10。0 g NaCl、 5。0 g Yeast Extract加纯水搅拌溶解后定容至1000 mL，PH调至7。0，分装后121℃灭菌20 min。LB固体培养基基本成分在此基础上每100 mL加入1。5 g琼脂粉。

（2）MM基础培养基

将5。0 g glucose、 2。0 g (NH4)2SO4、 0。2 g MgSO4· 7H2O、 4。0 g K2HPO4、 6。0 g KH2PO4、 1。0 g Na3C6H5O7·2H2O，加纯水搅拌溶解后定容至400 mL，调节pH至7。0，以100 mL为一瓶分装后，每瓶加入0。27 g的细菌琼脂粉，121℃灭菌20 min。来;自]优Y尔E论L文W网www.chuibin.com +QQ752018766-