本实验参考文献体系[9]构建。孵化后的大豆蛋白在SDS-PAGE电泳中进行分离。10μg大豆蛋白在12。5%的SDS-PAGE电泳中分离后，用考马斯亮蓝R250染色。电泳后将蛋白转移到PVDF膜上，进行转印，转印结束后进行膜上的DNPH衍生（62。5mg DNPH和3mL1MHCl溶于50mL乙腈中）。随后将膜用脱脂奶粉包被过夜。一抗为anti-DNP抗体，孵化3小时。二抗为相应的HRP标记抗体，孵化1小时。然后用发光试剂（ECL）处理并显影。

按OXYblot试剂盒进行Western blotting定量分析：

（1）制胶：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。

（2）电泳：Marker3µl，样品20µl，恒压150V。

（3）膜、滤纸、胶处理（同时进行，各项处理结束后时间点相同）

PVDF膜：100%甲醇浸泡30S，蒸馏水洗2min,转膜缓冲液浸泡3次，每次5min；

滤纸：转膜缓冲液浸泡10min；