枸杞多糖在口腔及胃肠道中的体外模拟消化研究(2)
研究碳水化合物在体内的消化的方法有很多，但通常耗时，对消化产品的分析花费大[6]因而衍生了一系列体外消化的方法并逐步标准化[7]。体外消化模型能模拟人体生理状况，重现性好，一定程度上与体内结果一致，同时还能检测大量样品因而得到广泛应用[8,9]。一般通过测定消化反应后的还原糖含量、糖的组成及糖苷键、分子量、形态变化等研究多糖体外消化的状况[6,10-12]。本论文采用体外唾液、胃液和胃肠液消化模型，对枸杞多糖体外消化的情况进行研究，以为其他多糖的消化提供参考。
1 材料、试剂及仪器
1．1 实验材料
枸杞样品种类为宁夏1号枸杞。
1．2 主要试剂
甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、葡萄糖醛酸、核糖、木糖，美国sigma公司；
鼠李糖，岩藻糖，阿拉丁试剂公司；
3,5-二硝基水杨酸，国药集团化学试剂有限公司；
胃蛋白酶、胃脂肪酶、胰酶，北京索莱宝科技有限公司；
其余试剂，均为国产分析纯。
1．3 相关消化液配制
1.3.1 胃液的配制
参考Tedeschi等[13]的配制方式对胃液进行配制，并适当做改进。
配制胃电解质溶液（GES）按以下方法进行：称取0.775gNaCl，0.275gKCl，0.0375gCaCl2，0.15gNaHCO3，加入超纯水并定容于250ml的容量瓶中，用0.1M的HCl将GES的PH调至3。
配制胃液按以下方法进行：称取37.5mg胃脂肪酶，35.4mg胃蛋白酶加至150g胃电解质中，再加入1.5mlCH3COONa（1M，pH=5）。室温下用磁力搅拌器搅拌10min，再用0.1M的HCl将胃液pH调至3，放置在冰箱中以备用。
1.3.2 小肠液的配制
参考Tedeschi等[13]的配制方式对小肠液进行配制，并适当做改进。
配制肠电解质溶液（SIES）按以下方法进行：称取0.54g NaCl，0.065g KCl，0.033g CaCl2，加入超纯水并定容于100ml的容量瓶中，用0.1M的NaOH将溶液pH调至7。
配制胰酶溶液按以下方法进行：称取1.4 g胰酶并溶于20g超纯水中，室温下用磁力搅拌器搅拌10 min，然后离心10 min（4800 rpm），收集10 g上清液以备用。
配制胆汁按以下方法进行：称取4g猪胆粉，加入超纯水并定容于100ml容量瓶中（4%，w/w）。
真实的小肠环境为十二指肠液环境，为了使实验更为精确地模拟小肠的真实环境，小肠液按以下方法进行配制：向10g SIES中加入20g胆汁，与此同时再加入10 g（7%，w/w）胰酶溶液和1.3mg胰蛋白酶获得前期小肠液（SIENZY），再用0.2M的NaOH将制得的小肠液pH调至7.5。
1．4 实验仪器与设备
AY-120/BL-220H型电子天平（日本Shimadzu公司）；
EPED-E2-10TH型实验室级超纯水器（南京易普易达科技发展有限公司）；
HH-6数显恒温水浴锅（江苏国华电器有限公司）；
DHG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）；
EYELAN-1100真空旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）；
Telstar*LyoQuest冻干机（西班牙Telstar公司）；
DELTA 320 pH计（梅特勒-托利多仪器有限公司）；
Agilent 1100 高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；
LC-20A 高效液相色谱仪（日本岛津）；
TSK-gel G4000 PWXL (7.8×300mm, 10μm)（日本TOSOH公司）；
Eclipse Plus C18(4.6×250mm, 5μm)（美国Agilent公司）；
漩涡混匀器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；
V-1200型可见分光光度计（上海美普达仪器有限公司）。