为了能通过环保高效的方式直接获得氨基葡萄糖,本实验采用通过N-乙酰氨基葡萄糖酶水解N-乙酰氨基葡萄糖得到终产物氨基葡萄糖的方法,其原理如图1所示。实验所用的N-乙酰氨基葡萄糖酶是一种脱乙酰酶,为基因Tk编码的Tk酶。基因Tk是从Thermococcus kodakaraensis KOD1基因组DNA[14]中克隆出的脱乙酰基因,其片段大小为804bp,其编码的Tk酶的分子质量为30,300 Da。为了提高酶的表达,本实验将从启动子、诱导剂浓度、诱导温度、金属离子四个因素分别展开探究。启动子对酶的表达起着很关键的作用,因此要根据目标酶的性质来选择适合的。IPTG是常用的诱导,剂竞争性地与阻遏蛋白结合而开放目标蛋白基因,让其可以进行转录,是诱导剂IPTG的作用机制。所以对IPTG用量的控制非常关键,探究影响酶的表达的因素时,IPTG诱导剂浓度是非常值得探索的一个因素。而温度是常常会被考虑的因素,多数时候温度对酶表达的影响非常大,尤其是对一类对温度极其敏感的酶,略有温度变化就可能使酶的活力大大下降甚至失活。当然若处于适宜的温度,则对酶的表达也可以达到大大提升的效果。

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